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猪繁殖与呼吸综合征（porcine reprodluctive and respiratory syndrome,PRRS）是由PRRS病毒（PRRSV）感染所致的一种急性传染病,是目前严重危害我国乃至世界养猪业的重要病毒性传染病。目前尚无针对该病确实有效的防止措施,研发新型的抗病毒方法已经成为PRRS研究的热点。PRRSV非结构蛋白Nsp9具有RNA依赖的RNA聚合酶活性,在病毒基因复制和转录过程中发挥着关键的作用,并且Nsp9在不同毒株之间相对比较保守,因此Nsp9是研发抗病毒药物的理想靶蛋白。本实验表达并纯化了可溶性Nsp9重组蛋白,将其免疫成年雄性双峰驼。经过5轮免疫后采集实验动物血液,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA并反转录cDNA,利用巢式PCR扩增VHH基因,将其连入pCANTAB 5E噬菌体载体,转化TG1感受态细胞构建双峰驼重链抗体可变区抗体文库。利用噬菌体展示技术筛选Nsp9特异性纳米抗体,经过3轮淘选,筛选到8株Nsp9特异性纳米抗体。co-IP实验表明在细胞质中表达的纳米抗体Nb6和Nb7可以特异性结合Nsp9。为了研究纳米抗体潜在的抗病毒功能,我们构建了稳定表达Nb6和Nb7的Marc-145细胞系,细胞增殖实验结果表明纳米抗体并不影响细胞的生长。病毒感染实验结果表明Nb6可以抑制不同PRRSV毒株（SD-16、JX-A1、GD-HD、VR2332）在Marc-145细胞中的增殖。研究还发现,稳定表达Nb6的Marc-145细胞细胞病变（CPE）出现的时间要明显晚于对照组。用0.01 MOI或更低的毒量接种Marc-145Nb6细胞系,感染后5天细胞没有出现CPE,并且上清中未检测到感染性的PRRSV。进一步的研究发现,Nb6是通过抑制PRRSV基因的复制和转录进而抑制病毒的增殖。本实验制备了PRRSV Nsp特异性纳米抗体,为Nsp9及其功能的研究提供了有用的工具。其中Nb6可以抑制病毒的增殖,其有望开发成为新型的PRRS治疗药物。