目的 胚胎干细胞具有多向分化潜能,但在应用时存在一定的伦理道德问题。孤雌胚胎干细胞是在缺少雄性配子基因组的情况下直接激活MⅡ期卵子,能够形成孤雌囊胚,避免了社会问题。我们首先将孤雌胚胎干细胞(pESOs)诱导分化为间充质干细胞,进一步诱导分化为肌腱样细胞,进行肌腱再造。方法 建系的pESCs体外培养,通过RT-PCR,免疫组织化学检测检测全能性转录因子SSEA-1、Nanog及OCT4,体内分化检测pESCs的全能性。制备拟胚体,贴壁培养,获取pESCs来源的MSC,real-time PCR检测(轴中胚层、脊索旁中胚层、间介中胚层、侧中胚层)细胞表面标志变化,RT-PCR检测上皮,肌肉,造血等标志,流式细胞术及免疫组织化学检测细胞表面抗原,体外将其诱导分化为骨,软骨,脂肪并进行验证。将MSC进一步分化为肌腱样细胞,接种于PLGA三维支架材料,进行肌腱再造。结果 pESCs在体外培养条件下能稳定增殖,表达SSEA-1、Nanog及OCT4,在体内可以分化为三个胚层的细胞类型。通过拟胚体自主分化,随分化时间延长,胚外中胚层(Foxf1,Hand1,Gata2),轴中胚层(pax3,pax7,Myod1),间介中胚层(pax2,pax8)等的表达逐渐升高,此外CD34,CD31,Sca-1等标志也呈逐渐升高的趋势,Nanog及Oct4表达降低,流式细胞术检测显示符合大部分间充质干细胞特征,免疫组化显示CD151,Vimentin,ITGB1,MHC等均表达。透射电镜显示细胞核浆比例变小,线粒体,高尔基体增多,内质网高度扩张,细胞内出现丝状物,组织学染色及免疫组化肯定了上述细胞具有形成骨,软骨,脂肪的能力。向肌腱样细胞定向诱导分化后,肌腱特异性基因Eya2,Epha4,Six1均开始不断增多,诱导后的肌腱样细胞接种于PLGA材料上,激光共聚焦和扫描电镜观察显示细胞在材料表面贴附良好,并能够稳定增殖,形成了肌腱样组织。结论 孤雌胚胎干细胞可以分化为MSC,经定向诱导分化后可分化为肌腱样细胞,用于组织工程肌腱再造。