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目的:内皮细胞的迁移在血管新生、伤口愈合、内皮损伤的修复等过程中起着重要的作用。肌动蛋白的重排在细胞移动过程中起着重要作用。血管扩张刺激磷蛋(vasodilator-stimulated phosphoprotein,VASP)能调节细胞移动过程中的肌动蛋白的重排。我们通过RNA干扰抑制内皮细胞ECV304中肌动蛋白相关蛋白VASP的表达水平,研究VASP在内皮细胞ECV304迁移过程中的作用。
方法:化学合成针对VASP的特异性siRNA片段(VASP-942、VASP-1002、VASP-1024)和阴性对照siRNA,通过半定量RT-PCR和Western blotting分别检测mRNA和蛋白表达水平,细胞损伤修复实验检测转染细胞的迁移能力。
(1) 通过半定量RT-PCR和Western blotting分别检测VASP的mRNA和蛋白表达水平,筛选出针对VASP的最有效的siRNA 片段;
(2)以筛选出的最有效的VASP-siRNA转染ECV304细胞,设立阴性对照和空白对照,检测细胞中VASP的mRNA表达水平和蛋白表达水平以及细胞的迁移能力。
结果: VASP-siRNA 转染ECV304 后,与对照组相比,被转染细胞中VASP的 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05),细胞的迁移能力明显增强(P<0.05)。
结论:成功设计并筛选出针对VASP的特异性siRNA片段;(2)VASP对内皮细胞 ECV304的迁移能力有着重要的调节作用,内皮细胞ECV304中VASP表达水平的下降可促进内皮细胞的迁移。