论文部分内容阅读
目的：研究miR-26a对胶质母细胞瘤（glioblastoma multiforme，GBM）细胞放疗敏感性的影响，并探索其相关分子学机制，深入了解miR-26a在GBM放疗敏感性方面的潜在意义，为GBM的个体化治疗提供更多的分子学基础。方法：利用Real-time PCR检测U251、A172、T98g三种放疗敏感性不同的GBM细胞系中miR-26a的表达水平；构建miR-26a过表达和敲低的GBM细胞系稳定株，进行克隆形成实验；利用流式细胞术测定miR-26a过表达后的GBM细胞周期变化；通过BrdU细胞增殖实验观察miR-26a对GBM细胞增殖的影响；流式细胞术测定放疗之后miR-26a过表达的GBM细胞的凋亡情况；单细胞免疫荧光实验（γH2AX fociassay）以及彗星实验判定miR-26a对GBM细胞DNA修复的影响；通过miRanda预测miR-26a的可能靶点，并结合双荧光素酶报告实验进一步验证； Western Blot检测在过表达和敲低miR-26a之后，ATM以及下游因子p-CHK2和p53的变化；构建原位胶质瘤动物模型，利用MRI磁共振成像观察放疗前后GBM肿瘤的体积变化，并进行生存分析。结果：U251、A172、T98g三种GBM细胞系中，miR-26a的表达水平与细胞放疗敏感性相一致；相对于空载体对照组而言，miR-26a敲低的U87和U251细胞接受放疗后具有较多的克隆数(P＜0.05)，而miR-26a过表达后则克隆数减少(P＜0.05)；过表达miR-26a之后， U87细胞的S期缩短(P＜0.05)，细胞增殖能力增强(P＜0.05)，且接受放疗之后的细胞凋亡比例较增高（P＜0.001）；接受放疗之后，相对于空载体对照组，miR-26a敲低的U87细胞中γH2AX foci的数量较少（P＜0.05），彗星尾的长度较短（P＜0.05），而在miR-26a过表达的U87细胞中则相反；miR-26a可靶向作用于ATM，并进一步诱使其下游因子p-CHK2和p53的表达水平降低；动物实验显示miR-26a过表达的原位胶质瘤小鼠在接受放疗后肿瘤体积较小（P＜0.05），生存周期更长（P＜0.05）。结论：miR-26a可靶向作用于ATM，进而影响同源重组修复通路，降低GBM细胞的DNA修复能力，并最终增强了GBM细胞的放疗敏感性。