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目的:随着人口老龄化的加重和人口基数的增长,冠心病合并恶性肿瘤的发病率逐年攀升,正在对人类生命构成更加严重的威胁。本项目通过建立心肌缺血复合肿瘤双重模型,观察三七总皂苷及其有效活性成分在复杂病理环境下的作用,并探索其可能的作用机制,以期为临床治疗缺血性心脏病复合恶性肿瘤药物的研究提供可靠的科学数据和理论依据。
方法:本实验分为体外细胞学实验与体内动物实验。1.体外实验:选择人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)及肺癌细胞(Lewis lung cancer,LLC)为受试对象。(1)采用MTT方法观察三七总皂苷及其有效成分在两种不同条件下对HUVECs增殖活力的影响。①正常细胞培养条件(5%CO2,21%O2)下:检测不同浓度的三七总皂苷及其有效活性成分在24h、48h时对HUVECs增殖活力的影响;②缺氧细胞培养条件(5%CO2,1%O2)下:检测不同浓度的三七总皂苷及其有效活性成分在12h、24h时对HUVECs增殖活力的影响;(2)采用MTT方法观察三七总皂苷及其有效成分对LLCs增殖活力的影响。2.体内动物实验:(1)造模:实验选用C57BL/6雄性小鼠,采用经皮下移植LLCs肿瘤细胞及腹腔注射异丙肾上腺素的方法制备肿瘤复合心肌缺血动物模型;(2)分组用药:将动物分为正常组、模型组、PNS组、人参皂苷Rg1组、人参皂苷Rb1组、三七皂苷R1组,腹腔注射进行药物干预。(3)病理学检查:石蜡切片,HE、Massons Trichrome染色光镜下观察心肌组织病理形态学变化;(4)免疫组织化学的方法检测心肌组织及肿瘤组织中CD34、vWF的表达。
结果:1.体外实验:(1)正常细胞培养条件下,三七总皂苷能够促进HUVECs的增殖,存在浓度依赖性及时间依赖性;其有效活性成分也均能够不同程度的促进HUVECs的增殖,其中三七皂苷R1的促进作用最为显著。(2)缺氧细胞培养条件下,三七总皂苷能够促进HUVECs的增殖,且与药物剂量之间存在浓度依赖性及时间依赖性;其有效活性成分也均能够不同程度的促进HUVECs的增殖,其中PNS作用最为显著。(3)PNS及三七皂苷R1有一定的直接抑制肿瘤细胞增殖的作用。2.体内实验:(1)药物对肿瘤的抑制作用:与模型组比较,PNS组可达82.48%,人参皂苷Rg1组可达54.11%,人参皂苷Rb1组可达40.30%,三七皂苷R1组可达71.26%。(2)病理组织形态学:①HE染色显示,与正常组比较,模型组心肌组织明显纤维化;与模型组比较,PNS组、人参皂苷Rg1组、人参皂苷Rb1组及三七皂苷R1组心肌纤维化均有不同程度的改善,间质成纤维细胞减少,心肌纤维排列基本整齐,血管周无明显纤维化。②Massons Trichrome染色显示,模型组(23.17±8.31)%,PNS组(8.18±3.22)%,人参皂苷Rg1组(9.64±2.87)%,人参皂苷Rb1(8.72±2.13)%,三七皂苷R1(10.16±4.31)%。与模型组比较,治疗组心肌纤维化明显改善。(3)免疫组织化学方法检测CD34、vWF的表达:模型组和给药组心肌组织、肿瘤组织均可见棕色的阳性血管内皮细胞分布。通过图像分析系统量化,与模型组相比,治疗组肿瘤组织CD34与vWF的表达量显著降低,提示治疗组肿瘤组织微血管数目减少;与模型组相比,治疗组心肌组织CD34与vWF的表达量显著升高,提示治疗组心肌组织微血管数目增加。
结论:1.三七皂苷及其有效活性成分对内皮细胞在不同条件下均有促进其增殖活力的作用,对肿瘤细胞高剂量的PNS、三七皂苷R1有一定的抑制作用。2.在心肌缺血复合恶性肿瘤复杂病理环境下,三七皂苷及其有效活性成分具有改善心肌缺血损伤的同时抑制肿瘤生长的作用。3.三七皂苷及其有效活性成分对心肌缺血的改善作用具有主次之分,对肿瘤生长的抑制作用亦具有主次之分。4.三七皂苷及其有效活性成分在复杂病理环境中的双向作用可能与血管生成有关。