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花青素属黄酮类化合物,是一类非常重要的植物次生代谢产物,它不仅能够影响植物的外观形态(尤其是花的颜色),而且对植物的代谢生理(尤其是生殖生理)也有重要的作用。 在许多高等开花植物中,尤其是在进化上亲缘关系比较近的物种,花青素合成各步骤所需酶的结构基因高度保守。这就意味着,这些植物色素表现式样的不同,可能是因控制这些结构基因表达的调节基因作用的差异所致。 c1与r是两类从玉米中分离到的转录因子基因,C1属MYB转录因子,R属bHLH转录因子,它们之间的协同作用在在花青素合成中起着非常重要的调节作用。后来人们又发现了c1的等位突变基因c1-I,它在相应基因转录方面的调节作用与c1相反:抑制花青素的合成。 本实验通过RT-PCR的方法从玉米(2K1-紫)中克隆到两个调节基因,命名为c1-I-2K1和r-2K1,序列分析表明其编码的蛋白分别属于MYB及bHLH家属。通过分子克隆技术,将c1-I-2K1、r-2K1和二者的连接(c1-I-2K1—r-2K1)分别构建到双元表达载体上,并使它们分别置于35S启动子的驱动之下,然后通过农杆菌介导的技术分别对烟草(Nicotiana tabacum,W38)进行了转化,利用组织培养技术再生植株。通过分化植株的生根培养、PCR鉴定和Southern杂交等一系列手段,筛选出阳性植株,移栽到室外观察。 结果表明:转c1-I-2K1基因烟草的花呈白色,而其它两种转基因烟草的花色与对照无明显差别,都为粉红色。由此我们可以得到启示:第一,C1-I-2K1蛋白的确能抑制转基因烟草花青素的合成;第二,在高等植物中,有些物种间花青素合成的调控途径可能存在保守性;第三,单独的R-2K1蛋白对转基因烟草的花青素合成无明显作用;第四,R-2K1蛋白可能需要在C1-I-2K1蛋白协同下才会起作用,并且这种作用能抑制C1-I-2K1蛋白对转基因烟草花青素合成的抑制作用;第五,通过转基因的方法来改变植物花色有着明朗的应用前景。