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背景和目的:心房颤动(AF)是最常见的快速房性心律失常,胞内钙紊乱在房性心律失常中发挥着重要作用,然而Ca2+活动和触发活性的潜在关联在AF中仍然知之甚少。本实验采用储钙蛋白2突变(Calsequestrin 2 R33Q/R33Q或CASQ2R33Q/R33Q或R33Q)Ca2+紊乱模型鼠,通过研究胞内Ca2+信号及触发活动及Ca2+敏感离子流的关系,为了揭示Calsequestrin 2缺失在AF中的作用,以及胞内Ca2+紊乱诱发触发活动参与AF发生的电生理机制。方法:采用经食道快速起搏的方法检测在体CASQ2R33Q/R33Q小鼠及Wild Type(WT)小鼠的AF诱发易感性。Ca2+免疫荧光技术用于检测细胞内Ca2+基础水平、自发性钙波频率、钙波达峰时间、钙波衰减时间、自发性钙火花频率、钙火花达峰时间、钙火花衰减时间。利用膜片钳技术,电流钳模式下检测动作电位(AP),观察比较两组心房细胞延迟后去极化(DADs)或早期后去极化(EADs)引起的膜振荡,静息电位(RMP)和动作电位时程(APD20、APD50、APD90);电压钳模式下检测两组心房细胞的Ca2+敏感电流,包括L型钙电流(ICa-L)和瞬时内向电流(ITi)及相关电流门控机制的影响。利用western blot技术以测量SR钙释放通道--兰尼碱受体2(RyR2)的蛋白表达,以及RyR2稳定亚基--储钙蛋白2(CASQ2)、三联体蛋白(Triadin)和连接蛋白(Juctin)的蛋白表达。还评价了异丙肾上腺素(Iso)和钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)抑制剂(KN93)对细胞内Ca2+信号、膜振荡及ITi的影响。结果:在体经食道快速起搏研究表明,与WT小鼠相比,R33Q小鼠AF诱发率更高(31.57%6/19 vs 4.56%1/22,P<0.05)。在R33Q组中,腹腔注射1.5mg/kg Iso能使AF发病率显着增加(52.63%10/19 vs 9.09%2/22,P<0.01)。与WT小鼠相比,R33Q组的心房细胞内Ca2+基础水平更高(37.56±4.33F vs 23.55±1.23F,P<0.05),自发性钙波频率增加(11.74%vs 2.24%,P<0.01),ITi电流增大(-0.56±0.017pA/pF vs-0.42±0.014pA/pF,P<0.05)和膜电位震荡发生率增加(10.7%vs 4.1%,P<0.05),但ICa-L(-3.94±0.53pA/pF vs-3.42±0.26 pA/pF,P>0.05)无显着性差异。1umol/L Iso进一步增加自发性钙波发生(from 11.74±0.35%to17.83±1.72%,P<0.01),ITi电流显著增大(from-0.56±0.017 pA/pF to-0.78±0.03 pA/pF,P<0.05)和膜震荡频发(from 10.7%to 35.7%,P<0.01)。Iso运用使两组的ICa-L均有增加,但是R33Q组增加明显(from-3.94±0.53 pA/pF to-9.01±0.79 pA/pF vs from-3.42±0.26 pA/pF to-7.45±0.37pA/pF,P<0.05),而L型钙通道没有门控动力学的功能改变。CaMKII抑制逆转Iso对SCaE的影响(from35.7%to 6.42%),对ITi的影响(from-0.78±0.03 pA/pF to-0.61±0.026 pA/pF,P<0.01)和对膜电位振荡的影响(from 35.7%to 14.25%,P<0.01)。与WT组相比,R33Q组中RyR2蛋白的结合亚基有不同程度的减少,包括CASQ2(减少55%)、Triadin(减少63%)和Juctin(减少30%),具有统计学意义(P<0.01),而RyR2蛋白表达两者间无明显变化。结论:这项研究表明:(1)R33Q小鼠更容易发生房颤。R33Q心房肌细胞中自发性钙释放增加对应于ITi电流的增加,其易于触发膜电位振荡(EAD/DAD),具有诱导Ca2+触发电活动和AF风险。Iso增加了R33Q组的房颤诱发率、自发性钙释放、膜电位振荡、ITi电流密度,是R33Q小鼠诱发房颤的危险因素之一(2)通过蛋白水平,发现R33Q心房肌细胞自发性钙释放事件的发生是RYR2蛋白的稳定亚基的表达减少,而不是SR RYR2的表达改变。(3)CAMKII抑制剂可以减轻Iso诱导的Ca2+触发活动,包括自发性钙释放事件、膜电位振荡、ITi电流密度。CaMKII抑制是Ca2+触发AF的治疗策略。