第一部分：发育期给予DNA甲基化抑制剂对成年小鼠行为学影响及机制的研究　　目的：通过研究发育期小鼠给予DNA甲基化抑制剂5-Aza对其成年后行为学影响及机制，阐明发育期DNA甲基化模式的变化对神经发育的影响及其在神经精神疾病发生中的作用。　　方法：通过旷场实验、明暗探索实验、高架十字迷宫实验及悬尾实验研究发育期给予DNA甲基化抑制剂5-Aza对成年小鼠行为学的影响；并测定各组试验鼠的脑重与体重比；采用Brdu免疫荧光化学法测定海马齿状回细胞增殖情况；ELISA法测定小鼠脑内BDNF、5-HT及NE的蛋白水平；RT-PCR法测定脑内BDNF、5-HT1Ar、5-HT2Ar、NET、p53及Gadd45αmRNA表达水平；Westernblot测定脑内p53及Gadd45α蛋白表达情况，通过以上方法研究阐明发育期给予DNA甲基化抑制剂5-Aza对小鼠神经发育影响及机制。　　结果：与对照组相比，在旷场实验中5-Aza组小鼠水平运动的距离及垂直站立的次数均降低(P<0.01)；在明暗探索实验中，5-Aza组小鼠在明场的停留时间延长，穿梭次数增加(P<0.01)；在高架十字迷宫实验中，5-Aza组小鼠在封闭臂的活动时间降低，而在开放臂的活动时间延长(P<0.01)；在悬尾实验中，5-Aza组小鼠的累积不动时间增加(P<0.01)。研究还表明，5-Aza组小鼠的脑重与体重比降低(P<0.01)；5-Aza组小鼠海马齿状回部位Brdu阳性细胞数量及细胞密度较对照组降低。ELISA结果显示，给予5-Aza后，BDNF在海马部位的表达水平较对照组减少(P<0.01)，而在前额叶皮层的表达较对照组增加(P<0.01)；5-HT在前额叶皮层、纹状体及海马部位的表达水平较对照组降低(P<0.01)；NE在前额叶皮层及海马部位的表达水平较对照组减少(P<0.01)；RT-PCR结果表明，给予5-Aza后，BDNF在海马部位的mRNA表达水平较对照组减少，而在前额叶皮层处的表达较对照组增加(P<0.01)；5-HT1Ar及5-HT2Ar在前额叶皮层、纹状体及海马部位的mRNA表达水平较对照组减少(P<0.01)；NET在纹状体及海马部位的mRNA表达水平较对照组增加(P<0.01)；p53及Gadd45α在前额叶皮层及纹状体部位的mRNA表达水平较对照组均降低(P<0.01)；Western blot结果表明，5-Aza组小鼠脑内p53及Gadd45α表达水平与对照组相比增高(P<0.05)。　　结论：发育期给予DNA甲基化抑制剂5-Aza能引起成年小鼠躁狂抑郁样行为；5-Aza引起小鼠行为学的异常可能是通过改变BDNF、5-HT1Ar、5-HT2Ar、NET、p53和Gadd45α等基因甲基化模式，影响其表达水平，从而抑制神经发生，引起神经精神异常。　　第二部分：DNA甲基化抑制剂5-Aza对体外培养神经干细胞增殖的影响　　目的：研究DNA甲基化抑制剂5-Aza对体外培养神经干细胞(neural stemcells，NSCs)增殖的影响，阐明DNA甲基化在NSCs增殖过程中的调节作用，进一步明确DNA甲基化模式的变化对神经发生的影响及机制。　　方法：采用无血清悬浮培养方法分离培养新生小鼠脑NSCs，以PBS作为对照，分别给予5、10、20μmol/L的5-Aza进行处理，通过MTT法检测NSCs的增殖情况；采用流式细胞术分别测定NSCs的细胞周期及凋亡情况。　　结果：研究结果表明，5-Aza组NSCs增殖能力较对照组降低(P<0.01)；细胞周期测定结果显示，5-Aza组NSCsG0/G1期细胞比例较对照组下降(P<0.01)，而S和G2/M期细胞比例较对照组增加(P<0.01)，表明5-Aza可引起细胞周期在G2/M期停滞；凋亡测定结果显示5-Aza组NSCs凋亡率较对照组提高(P<0.01)。　　结论：体外研究结果表明，5-Aza能抑制NSCs的增殖，可能通过影响细胞周期和诱导NSCs凋亡引起的；5-Aza引起的NSCs细胞周期G2/M期停滞可能与影响p53/Gadd45信号途径有关。