论文部分内容阅读
目的1.比较基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)与16S r RNA基因测序鉴定女性阴道乳杆菌方法,同时探究不同阴道微生态背景的汉族育龄女性阴道内乳杆菌的种类及其分布情况。2.使用基于16S r RNA基因的高通量测序检测女性阴道菌群概况及乳杆菌丰度,同时探究不同阴道微生态背景的育龄女性的阴道菌群。方法1.对260例育龄女性阴道拭子进行阴道微生态分析及乳杆菌的分离培养,根据阴道微生态鉴定结果分为正常组(173例)、中间型细菌性阴道病组(IBV,55例)、细菌性阴道病组(BV,9例)和念珠菌性阴道炎组(VVC,23例),分离乳杆菌并进行纯化培养,纯化的乳杆菌经MALDI-TOF MS和16S r RNA基因测序鉴定并进行聚类分析。2.对其中148例汉族育龄女性阴道拭子根据阴道微生态鉴定结果,分为正常组(97例)、IBV组(29例)、BV组(8例)、VVC组(14例),通过乳杆菌培养结果分为乳杆菌组(L组)82例、无乳杆菌组(NL组)66例,使用illumina测序系统测序并进行生物信息学分析。结果1.两种方法鉴定的一致率为96.9%(249/257)。260例标本中有149例(57.3%)检出了乳杆菌,总共发现了17种乳杆菌,检出的乳杆菌分布于5个乳杆菌系统发育群,其中分离出最多的乳杆菌依次为卷曲乳杆菌(41例)、加氏乳杆菌(38例)、阴道乳杆菌(21例)。正常组中有116例(67.0%)标本分离出乳杆菌,IBV组有19例(34.5%),BV组仅2例(22.2%),VVC组有12例(52.2%)。正常育龄女性与患BV女性乳杆菌种类与数量差异显著(χ~2=22.9360,P<0.0001),与患VVC女性无明显差异(χ~2=1.9830,P=0.1600)。与其他组相比,正常组中分离出卷曲乳杆菌的比例显著高于BV组和VVC组(χ~2=4.5480,P=0.0330;χ~2=5.6050,P=0.0200),VVC组分离出加氏乳杆菌的比例显著高于正常组(χ~2=5.0900,P=0.0350)。2.148例标本中共发现13种乳杆菌,其中检出相对丰度最高的乳杆菌依次为卷曲乳杆菌、惰性乳杆菌、近茎轴乳杆菌/詹氏乳杆菌、加氏乳杆菌、德氏乳杆菌和副干酪乳杆菌。从单个标本上看,正常组中90例(92.8%)标本分离出乳杆菌,IBV组中18例(62.1%)分离出乳杆菌,BV组有4例(50.0%)分离出乳杆菌,VVC组中12例(85.7%)分离出乳杆菌。正常组、IBV组和BV组间乳杆菌检出例数具统计学差异(χ~2=22.3400,P<0.0001)。正常组、IBV组和BV组之间的惰性乳杆菌检出例数存在显著性差异,随着BV严重程度加剧,惰性乳杆菌的检出比例随之升高(χ~2=6.7400,P=0.0340),VVC组卷曲乳杆菌的检出比例显著低于正常组(χ~2=4.4020,P=0.0360)。从整体分组上看,正常组、IBV组、BV组和VVC组的乳杆菌属在阴道菌群中的相对丰度分别为82.5%、42.7%、3.6%、58.0%,其中正常组和IBV组中相对丰度最高的乳杆菌是卷曲乳杆菌,BV组和VVC组中相对丰度最高的乳杆菌为惰性乳杆菌。阴道菌群分为5种阴道型,分别为以卷曲乳杆菌为主的VT1(46/148,31.08%),以惰性乳杆菌为主的VT2(33/148,22.30%),以其他乳杆菌和非乳杆菌属乳酸菌为主的VT3(11/148,7.43%),以阴道加特纳菌为主的VT4(38/148,25.68%),以多种其他菌共存的VT5(20/148,13.5%)。结论基于培养的方法与不依赖培养的方法鉴定分类乳杆菌的结果不完全一致,两类方法在检测乳杆菌种类和数量方面能够互补。育龄女性正常阴道菌群主要以卷曲乳杆菌和惰性乳杆菌为主,卷曲乳杆菌可能是反映育龄女性正常阴道微生态的标志物,惰性乳杆菌可能是提示BV和VVC发病风险增加的标志物。