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实验目的:研究职业性噪声聋工人与听力正常工人之间血清中micro RNAs(mi RNAs)的表达差异。通过实验筛选并验证表达差异性mi RNAs,并对其进行靶基因的预测和验证,分析职业性噪声聋致病机理,为后续的研究提供实验数据的支持。实验方法:1.从病人血样标本中分离出300-500μL的血清,并对其进行编号、记录和分装,并在-80℃冰箱进行长期保存。之后建立血液样本信息数据库,并从数据库中筛选后续实验所需的样本。2.对血清样本进行mi RNAs的分离与纯化。将提取出的总mi RNAs用分光光度计进行质量检测,确定浓度和总量是否能够进行mi RNAs的芯片杂交实验。3.进行mi RNAs标记反应体系的准备、10×Blocking Agent的配制、杂交样品的准备、杂交混合液的配制、芯片杂交、芯片洗涤、芯片扫描、芯片数据提取等操作流程,完成mi RNAs芯片实验。并通过图表对mi RNAs杂交实验结果进行评价。最终找出差异性mi RNAs。4.对芯片杂交实验的结果进行荧光定量PCR的验证,分析结果的可信度。再将筛选出的mi RNAs进行靶基因的预测,并验证其对靶基因表达的影响。结果:1.所有血液样本均已提取血清,并进行记录、编号及保存。建立血样数据库,在数据库中筛选出需进行后续实验的血清样本共6个,其中对照组3个,耳聋组3个。2.经过对实验所得mi RNAs进行质量检测,耳聋组(编号1-3)和对照组(编号1-3)样本的mi RNAs浓度及质量达到芯片杂交实验的标准。3.从6个样本的质量检测结果来看样本的完整性和纯度均符合实验要求。通过分析mi RNA芯片杂交实验结果,共筛选出8个差异性mi RNAs,它们是hsa-mi R-1229-5p,hsa-mi R-3162-5p,hsa-mi R-4459,hsa-mi R-483-5p,hsa-mi R-6087,hsa-mi R-6088,hsa-mi R-638和hsa-mi R-4484。4.荧光定量PCR的验证结果表明,在所选耳聋组样本中hsa-mi R-1229-5p和hsa-mi R-483-5p这两条mi RNAs的表达量均高于对照组。对它们的靶基因进行预测,其中hsa-mi R-1229-5p可能的靶基因为ATG101,MAPK1,SLC12A6,SLC25A24,SLC30A8和SLC9C1,hsa-mi R-483-5p可能的靶基因为SRF和MAPK3。经定量PCR结果验证,hsa-mi R-1229-5p的靶基因为MAPK1,SLC12A6,SLC25A24和SLC30A8,hsa-mi R-483-5p的靶基因为SRF。结论:1.芯片杂交结果表明,从6个样本中共筛选出8个差异性mi RNAs,它们是hsa-mi R-1229-5p,hsa-mi R-3162-5p,hsa-mi R-4459,hsa-mi R-483-5p,hsa-mi R-6087,hsa-mi R-6088,hsa-mi R-638,hsa-mi R-4484。2.经过验证发现职业性噪声聋工人血清中hsa-mi R-1229-5p,和hsa-mi R-483-5p的表达量均高于对照组。靶基因的预测结果及验证表明,hsa-mi R-1229-5p的靶基因为MAPK1,SLC12A6,SLC25A24和SLC30A8,hsa-mi R-483-5p的靶基因为SRF。