严重的急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrom，SARS)是一种传染性极强的呼吸系统疾病，2002年11月至2003年7月在我国内地和世界上30多个国家和地区出现流行，引起全世界高度关注。世界卫生组织于2003年4月16日确认，引起SARS的病原体是冠状病毒的一个变种，称为SARS相关冠状病毒(SARS-associatedcoronavirus，SARS-CoV)，其扩散范围之广，传播速度之快和对全球经济影响之严重为近年来发现传染病之最，对人们的身体健康和生命安全构成了严重威胁。为了预防SARS-CoV的再次出现，研制有效的预防SARS-CoV感染的疫苗，探讨SARS-CoV的致病机理指导临床用药乃当务之急。本研究利用N基因重组的疫苗免疫鼠，通过分析其诱导体液免疫和细胞免疫的能力研究其免疫原性；并且利用N基因重组的腺病毒感染肺上皮细胞、巨噬细胞和树突状细胞，探讨其在SARS-CoV急性感染中炎性细胞因子的产生机制，为认识SARS-CoV的致病机理奠定基础。 第一节 SARS-CoV N基因重组腺病毒载体的构建 为了研究N蛋白的免疫原性及致病性，利用Pfu DNA polymerase，通过PCR的方法扩增到目的基因，首先通过酶促反应构建N基因重组的转移载体，经过测序验证之后，将N基因重组的转移载体与腺病毒表达载体通过酶促反应进行同源重组，获得N基因重组的腺病毒，并对此病毒进行PCR和Western blot鉴定分析。另外，将此重组的腺病毒感染Vero E6细胞，通过Western blot鉴定分析N蛋白的表达。 测序结果表明，N基因重组的腺病毒转移载体含有全长N基因为1269bp，与GeneBank中的AY304495株SARS-CoV的标准序列进行比对