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菝葜（Smilax china L.）是百合科菝葜属多年生藤本落叶攀附植物,目前主要分布在缅甸、越南、菲律宾、泰国及中国等地的海拔2000米以下的山坡及河谷。菝葜主要的药用部位为其根茎,临床上主要用于治疗妇科炎症、关节疼痛、肌肉麻木等。目前研究已经证实菝葜具有免疫抑制、降脂、抗氧化、抗炎及抗肿瘤等活性,其中针对菝葜素、黄酮、酚类及萜类物质的研究较多,而菝葜多糖（Smilax china L.polysaccharide,SCLP）则较少有文献报道。本研究采用实验室前期已优化的成熟提糖工艺,从干燥的菝葜根茎中制备菝葜多糖。体内动物实验以对乙酰氨基酚（APAP）诱导建立的小鼠急性肝损伤模型为研究对象;体外细胞实验以H2O2诱导的氧化应激损伤AML12细胞模型为研究对象;旨在探究菝葜多糖对APAP诱导的急性肝损伤小鼠的缓解作用及其作用机制,为菝葜多糖的进一步应用提供研究基础。第一部分菝葜多糖的制备沸水中多次提取后浓缩从菝葜根茎中得到菝葜多糖水提液;水提液经醇沉、冻融干燥得到的产物再经过反复醇沉-冻融后,透析,冻干,得到浅红色棉絮状菝葜粗多糖;菝葜粗多糖经过DEAE-52纤维素柱及G50葡聚糖凝胶柱分离纯化后得到浅黄色棉絮状精制菝葜多糖SCLP。苯酚-硫酸法、间羟基联苯法、HPGPC及紫外扫描法结果显示,菝葜多糖的糖含量为91.66±1.49%,糖醛酸含量为85.93±1.66%,重均分子量为9.6 k Da、几乎不含蛋白质和核酸。本部分实验提取纯化的菝葜多糖性状及产率稳定,纯度高且分子量均一,可以用于后续的药理实验。第二部分菝葜多糖对APAP诱导小鼠急性肝损伤的保护作用本部分实验通过灌胃APAP（400 mg/kg）建立小鼠急性肝损伤模型,在造模前给予不同剂量菝葜多糖预防2周。在实验期间每日观察小鼠的精神状态并记录体重变化;在灌胃APAP前禁食12 h,造模后24 h处死小鼠;解剖后收集小鼠血清检测谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷胱甘肽（GSH）及乳酸脱氢酶（LDH）水平;制作肝脏组织H＆E染色切片;检测肝脏组织中活性氧（ROS）水平;检测肝脏组织中总超氧化物歧化酶（t-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、髓过氧化物酶（MPO）及丙二醛（MDA）的水平。实验结果显示,提前给予菝葜多糖2周后,高、低剂量给药组小鼠死亡率下降,肝脏形态及H＆E染色切片显示菝葜多糖能够显著改善APAP诱导的小鼠肝脏损伤现象。表明菝葜多糖对APAP诱导急性肝损伤小鼠有一定的保护作用。检测小鼠血清中肝损伤因子水平,其实验结果表明菝葜多糖能够显著改善小鼠肝脏损伤情况,减少肝脏坏死。此外,菝葜多糖给药组小鼠GSH含量较模型对照组小鼠显著性上升,表明菝葜多糖能够显著提升APAP诱导急性肝损伤小鼠的抗氧化能力。检测小鼠肝脏ROS水平的实验结果显示,菝葜多糖可以显著降低APAP所导致的小鼠肝脏ROS累积,表明菝葜多糖给药后可以缓解APAP诱导的急性肝损伤小鼠的氧化应激状态。检测小鼠肝脏相关氧化应激因子表达的实验结果表明菝葜多糖可以显著提高抗氧化酶的水平,同时缓解肝脏脂质过氧化程度。本部分实验结果证实菝葜多糖可以改善APAP诱导急性肝损伤小鼠的肝组织病理变化,提升小鼠肝脏的抗氧化能力,从而缓解肝脏的氧化应激及脂质过氧化程度。第三部分菝葜多糖对APAP诱导小鼠急性肝损伤保护作用的机制研究动物实验结束后,解剖小鼠,分离肝脏,提取肝脏总蛋白、核蛋白及浆蛋白,采用Western blot法检测小鼠肝脏Nrf2蛋白含量及其核转位程度。实验结果表明,菝葜多糖能够显著上调Nrf2蛋白的表达,同时促进Nrf2蛋白向细胞核内转位。电泳迁移率变动分析实验（EMSA）的结果表明,菝葜多糖可以增强Nrf2蛋白与抗氧化应激原件（ARE）的结合能力。同时为探究菝葜多糖是否激活Nrf2-ARE信号通路下游的抗氧化蛋白NQO-1、GCLC及HO-1的表达,采用Western blot法检测小鼠肝脏氧化应激相关蛋白NQO-1、GCLC及HO-1的表达水平。结果表明菝葜多糖能够上调小鼠Nrf2-ARE信号通路下游蛋白表达水平,改善肝脏的氧化应激,从而发挥对APAP诱导小鼠急性肝损伤的保护作用。本部分实验证明菝葜多糖能够通过促进Nrf2蛋白合成及核转位,增强Nrf2蛋白与ARE的结合能力从而激活Nrf2-ARE信号通路,上调相关蛋白NQO-1、GCLC及HO-1的表达量,从而改善肝脏氧化应激,发挥肝保护作用。第四部分菝葜多糖体外缓解细胞氧化应激压力的机制研究本部分实验建立了H2O2诱导的氧化应激损伤AML12细胞模型,用于验证菝葜多糖是否能够通过激活Nrf2-ARE信号通路,上调下游抗氧化蛋白的表达从而缓解细胞氧化应激压力。H2O2诱导AML12细胞前先用菝葜多糖预培养24 h,采用Western blot法检测AML12细胞中Nrf2蛋白的表达及核转位,Nrf2-ARE信号通路相关蛋白NQO-1、GCLC及HO-1的表达水平,结果与体内实验结果一致。上述结果表明菝葜多糖能够促进Nrf2蛋白合成及核转位,激活Nrf2-ARE信号通路,上调下游相关蛋白NQO-1、GCLC及HO-1的表达量,从而缓解AML12细胞氧化应激压力。