[目的]肝癌在世界范围内是最常见的五大实体肿瘤之一,其死亡率仅次于胃癌、食管癌,位居第三。己知的肝癌的病因包括乙型及丙型肝炎病毒感染、黄曲霉毒素等。近年来的研究表明,在肝癌发生与发展的过程中许多基因的表达及活性发生改变,其中就包括微小RNA（microRNA,miRNA）分子。miRNA是一类内源性的大小约22nt的非编码RNA分子,可经序列特异性翻译抑制或mRNA降解来调控基因表达,参与细胞发育、增殖、分化、凋亡等,约有1/3以上基因在转录后受其调控。新近研究结果表明,多种miRNA通过调节其靶基因参与肝癌的细胞生物程序调控,间接发挥癌基因和抑癌基因的功能。了解miRNA的调控机制,可为肝细胞恶性转化及肝癌的诊治提供理论依据。本课题着重研究miR-10a在肝癌细胞及肝癌转移动物模型体内的具体功能,鉴定其下游直接的靶基因,并通过进一步分析靶基因的功能及其参与的相关调控通路,结合miR-10a表达发生改变的调控性研究,深入探讨miR-10a发挥作用的具体分子机制及其可能的调控途径。[方法]首先利用实时荧光定量PCR技术（Real time polymerase chain reaction,Real-time PCR）检测miR-10a在20对肝癌及其癌旁组织中的表达水平;随后在人肝癌细胞系QGY-7703及HepG2中,通过过表达或封闭miR-l0a的表达,利用MTT实验、克隆形成、Transwell迁移和侵袭实验检测miR-10a对肝癌细胞恶性表型的影响;而后通过G418筛选后的过表达miR-10a单克隆细胞株注射入裸鼠脾内建立肝癌转移模型,进而研究miR-1 0a在体内对肝癌转移的影响;同时通过生物信息学方法,筛选miR-1Oa可能的靶基因,并利用荧光报告载体实验结合Real-time RT-PCR和Western blot技术验证miR-10a对其靶基因的直接调控作用及其可能的调控方式;然后利用RNA干扰技术,结合上述表型实验分析干扰靶基因表达后细胞表型的变化,研究靶基因的具体功能;随后应用细胞粘附实验、血管生成拟态实验及miR-10a及其靶基因的表达发生改变后一些相关分子的表达变化,从而进一步探讨miR-10a及其靶基因对肝癌转移的可能调控机制;最后通过一系列表型的挽救实验进一步验证miR-10a对其靶基因的直接调控及是否通过该靶基因发挥作用。[结果]miR-10a在肝癌组织中表达明显上调;在体外细胞实验中,过表达miR-10a明显增强QGY-7703及HepG2细胞的迁移和侵袭能力,对细胞活性及增殖无明显影响。而在体内实验中,miR-1Oa使肝内的转移灶明显减少。进一步筛选并证实了miR-10a发挥作用的直接靶基因——EphA4。深入研究靶基因的功能后发现,RNA干扰EphA4表达后细胞侵袭与迁移能力均明显增强,同样,对细胞活性及增殖无明显影响。进一步的细胞粘附及血管生成拟态实验表明,过表达miR-1Oa明显抑制肝癌细胞的粘附及血管形成能力,Western blot还发现了封闭miR-1Oa或增强EphA4的表达能够上调上皮细胞标志物E-Cadherin同时下调间皮细胞标志物Vimentin及ICAM-1的表达,此外,miR-10a的表达下调与EphA4的表达上调可使介导细胞-基质粘附的分子β 1-integrin表达增强,并可促进与血管形成有关的MMP-2分子的表达。[结论]miR-10a在肝癌组织中呈高水平表达,并首次发现miR-10a在体内及体外对肝癌转移的调控作用是相反的,即miR-10可促进肝癌细胞的迁移与侵袭而在体内却抑制肝癌的转移。导致这种相反作用的原因是miR-10a在体外可促进EMT过程从而促进肝癌细胞的移动,同时它又可抑制细胞-基质粘附及肿瘤细胞的血管形成能力从而导致体内转移灶的减少。miR-10a通过调节其直接靶基因EphA4的表达而发挥作用。此外,还发现miR-1 0a通过调控β1-integrin及MMP-2的表达而影响肝癌细胞粘附及血管形成能力。总之,这些结果初步阐明了miR-10a在肝癌转移中的功能及其作用的分子机制,将来可能会为开发肝癌新的诊断和治疗手段提供新的理论依据和实验基础。