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第一部分:大鼠原位肝移植(OLT)模型的建立目的探讨大鼠原位肝移植(OLT)模型的建立方法,为肝移植的相关研究提供稳定的模型基础。方法通过改良的Kamada“二袖套法”,对Wistar大鼠实施了同种原位肝移植手术,并观察大鼠术后存活率和并发症的发生情况。结果总共实行大鼠原位肝脏移植近220例,在40例定型手术中,供体手术时间(22.3±7)min,全肝移植组供肝修整时间(15.6±4)min,受体手术时间(50.6±11.2)min,无肝期为(20.6±2.5)min,手术成功率为100%,一周存活率为92.5%。成功地建立了稳定的大鼠肝移植模型。结论大鼠原位肝移植模型的建立,需要一定的显微外科基础和熟悉大鼠的腹部解剖结构的前提下,经过一段时间的专门训练,方能获得成功。其中娴熟的显微外科技术和耐心细致地手术操作是大鼠原位肝移植成功的关键。第二部分重组生长激素对大鼠肝移植术后早期胆汁淤积和肝脏功能的影响目的探讨重组生长激素(rhGH)对肝移植术后早期胆汁淤积和肝功能恢复的影响。材料与方法采用Kamada的双袖套法并加以改进,建立Wistar大鼠原位肝移植模型。按随机原则将大鼠分为三组:假手术组(SO组)、肝移植组(OLT组)、肝移植术后生长激素干预组(OLT+rhGH组)。每组按术后1d、3d、7d三个时相点再分成三个亚组,每一时相点6只大鼠,于预定时相点处死分别留取血清及肝脏组织标本,测定血清ALP、GGT、ALT、TBIL水平评估肝功能;酶联免疫法检测血清TNFα、IL-1β水平;放射免疫法测定血清生长激素(GH)水平;放射配体结合分析法分析移植肝生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)表达;高效液相色谱法(HPLC)检测肝组织ATP含量;用化学比色法测量肝脏中Na~+/K~+ATP酶等的浓度变化;免疫荧光染色半定量分析Mrp2的定位;RT-PCR法检测肝组织Mrp2mRNA表达;并将Mrp2mRNA与血清TBIL、TNFα作相关分析;常规病理结合电镜分别观察肝脏组织学及超微结构的改变。结果1.OLT+rhGH组血清ALT、ALP、TBIL、GGT、TNFα低于OLT组,差异均具有显著性意义(P＜0.05)。OLT+rhGH组血清IL-1β与OLT组比较无差别。2.在肝移植术后1d组和3d组,ATP含量和Na~+/K~+ATPase活性均有明显下降,至术后7d组各指标和SO组比较无差别。GH处理后各指标水平均较OLT组明显上升,差异具有显著性意义(P＜0.05)。3.OLT+rhGH组GH水平在术后1天,和SO、OLT组差别无统计学意义,而在术后3、7d组明显高于OLT组同时相点水平(P＜0.05),和SO组比较差别无统计学意义。大鼠肝移植术后GH-IGF-1轴发生改变,术后7d内GHR和IGF-1R表达呈下降趋势。rhGH治疗组术后7d GHR数恢复明显,术后3、7d IGF-1R数恢复明显(P＜0.05)。4.Mrp2转运蛋白特异性定位于肝细胞膜的毛细胆管面,荧光染色呈线条形勾勒出毛细胆管轮廓,给予rhGH的肝移植大鼠肝脏Mrp2表达水平明显增高,恢复加快。Mrp2的RT-PCR结果表明:其表达于术后3d达高峰。OLT术后Mrp2表达亦明显下调,给予rhGH的肝移植大鼠肝脏Mrp2RNA表达明显上调,水平明显增高,恢复加快。肝组织Mrp2基因的表达与血清TBIL、TNFα存在密切的负相关(P＜0.05)。5.肝组织常规HE染色和电镜检查均提示:重组生长激素干预的肝移植组的肝细胞损伤改变较未干预组轻。结论1.大鼠肝移植术后早期存在胆汁淤积。肝细胞功能恢复早于其形态学恢复。肝移植术后应用外源性GH对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤具有保护作用可促进热缺血损伤移植肝功能恢复。2.肝移植术后肝组织的能量代谢有显著改变。在术后肝组织ATP含量和肝细胞胞质膜Na~+/k~+ATP酶活性均显著降低,这表明此时胆汁淤积的发生有泵功能显著不足的因素参与作用。肝组织的泵功能不足是导致大鼠肝移植术后并发胆汁淤积的因素之一。3.大鼠原位肝移植后产生一过性GH抵抗,存在GH相对不足;热缺血损伤移植肝GH-IGF-1轴的改变与热缺血损伤移植肝恢复延迟有关;肝移植术后应用外源性GH可促进移植肝GH-IGF-1轴的恢复,并促进肝功能的恢复。4.Mrp2表达的减少以及定位的异常是鼠肝移植术后胆汁淤积发生的主要分子机制之一,rhGH促进胆红素的转运的作用机制可能是通过直接上调Mrp2表达来实现;也可能通过限制TNFα的过度释放间接上调Mrp2来促进胆红素的转运。