【摘 要】
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目的:通过慢病毒介导的方法来建立稳定表达人骨形态发生蛋白2（BMP2）基因的人牙周膜细胞系,来探究BMP2对人牙周膜细胞增殖及成骨能力的影响,并探究BMP2诱导人牙周膜细胞成骨过程中内质网应激水平的变化,从而为将自体牙作为新型骨组织修复材料应用于牙周再生和颌面部骨缺损的修复提供了一定的理论依据。方法:1.体外培养原代人牙周膜细胞,进行传代及鉴定;2.PCR方法扩增BMP2基因全长,构建重组慢病毒质
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目的:通过慢病毒介导的方法来建立稳定表达人骨形态发生蛋白2（BMP2）基因的人牙周膜细胞系,来探究BMP2对人牙周膜细胞增殖及成骨能力的影响,并探究BMP2诱导人牙周膜细胞成骨过程中内质网应激水平的变化,从而为将自体牙作为新型骨组织修复材料应用于牙周再生和颌面部骨缺损的修复提供了一定的理论依据。方法:1.体外培养原代人牙周膜细胞,进行传代及鉴定;2.PCR方法扩增BMP2基因全长,构建重组慢病毒质粒p LV-BMP2,然后感染人牙周膜细胞构建过表达BMP2的稳定牙周膜细胞系;3.通过CCK-8检测BMP2对牙周膜细胞增殖能力的影响;4.进行牙周膜细胞7、14、21d成骨向诱导,通过茜素红染色、ALP活性测定及RT-q PCR检测成骨相关基因m RNA相对表达水平来探究BMP2对人牙周膜细胞成骨向分化的影响;5.通过Western Blot和RT-q PCR检测内质网应激相关蛋白的表达水平来探究BMP2促进牙周膜细胞成骨过程中内质网应激水平的变化。结果:1.成功体外培养原代人牙周膜细胞;2.成功构建了同源重组慢病毒质粒p LV-BMP2并转染牙周膜细胞,转染后的细胞与正常细胞形态相似,均呈典型的放射状排列;3.CCK-8结果显示,与h PDLCs组及p LV-puro组相比,p LV-BMP2组牙周膜细胞增殖能力增强（P＜0.05）;4.茜素红染色和ALP活性测定结果均显示,与h PDLCs组及p LV-puro组相比,p LV-BMP2组牙周膜细胞成骨能力显著增强（P＜0.01）,并且RT-q PCR结果显示成骨相关基因在p LV-BMP2组牙周膜细胞中高表达（P＜0.01）;5.Western Blot结果显示,在BMP2促进牙周膜细胞成骨的过程中,内质网应激相关蛋白PERK表达水平显著增高。结论:成功建立了过表达p LV-BMP2的牙周膜细胞系,并证明BMP2具有较强的促进牙周膜细胞增殖及成骨向分化的能力,并且在BMP2促进牙周膜细胞成骨过程中内质网应激水平升高,这为牙周组织再生及牙周组织工程的研究提供了理论依据,也为将自体牙作为新型骨修复材料应用于牙周治疗及颌面部骨缺损修复提供了一定的理论基础。
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