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1.目的依据前期实验研究成果,加味四逆散(四逆散与生慧汤合方)对疲劳、失眠等所致记忆力下降具有调节作用；加味四逆散的这种调节作用与其可改善疲劳、睡眠剥夺所致的突触结构的改变,可以显著增加前额叶皮质突触后致密物厚度、使突触间隙明显变窄,从而改善突触传递有效性,增强突触传递效能有关。本课题从与学习记忆相关的神经元突触可塑性入手,采用SH-SY5Y神经细胞和PC12神经细胞作为细胞模型,分别从促神经细胞增殖和促神经细胞分化的角度研究生慧汤拆方与四逆散的神经营养作用,并进一步的探讨了药物促进PC12细胞长出突起的分子机制,为后续寻找改善学习记忆的单味药乃至单体提供思路。2.材料和方法第一部分实验,以SH-SY5Y神经细胞和PC12神经细胞作为细胞模型,分别从促神经细胞增殖和促神经细胞分化的角度观察益智复方药物生慧汤拆方及四逆散的作用效应；其中,通过CCK-8检测细胞活力来观察药物是否具有促神经细胞增殖作用,通过突起形态学观察及统计来观察药物是否具有促神经细胞分化的作用。第二部分实验,基于PC12细胞分化模型,首先从细胞增殖与分化间相互转化的角度对生慧汤拆方处方6和处方7的作用效应作了进一步的探索；然后,通过对神经生长相关蛋白GAP-43基因表达水平的检测,从分子的层面上研究处方6和处方7促进神经元突起生长的作用机制；其中,通过CCK-8试剂盒来检测药物处理后的细胞活力,通过Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测药物处理对细胞凋亡的影响,通过RT-PCR来检测药物对GAP-43表达水平的影响。3.结果3.1四逆散(炙甘草、枳实、柴胡、白芍)未表现出对SH-SY5Y神经细胞的促进增殖作用,而在PC12细胞模型上却明显抑制了神经突起的生长,神经细胞的分化率明显降低。3.2处方4(熟地、山茱萸)有促进SH-SY5Y神经细胞增殖的趋势,但在PC12神经细胞分化模型上却是抑制其突起生长,降低了分化率。3.3处方6(茯神、红参)促进了SH-SY5Y神经细胞的增殖,处方7(远志、石菖蒲、白芥子)则表现出对SH-SY5Y神经细胞抑制细胞活力的趋势；但二者均能够促进PC12神经细胞突起的生长,且具有剂量效应。其中,处方7中剂量组(200mg·L-1)促进突起生长的效果与神经生长因子NGF中剂量组(20μg·L-1)相当。3.4随着浓度的增大,处方6和处方7均表现出降低PC12细胞活力的作用。这种细胞活力抑制作用,体现了浓度依赖的效应,随着处方6和处方7浓度的增加,抑制作用更为显著。3.5流式检测结果表明,处方6和处方7并未提高细胞的凋亡率,提示药物降低PC12细胞活力可能是由于药物对PC12细胞增殖的抑制作用而非对PC12细胞的毒性作用。3.6RT-PCR检测结果表明,处方6和处方7均能够提高PC12神经细胞内GAP-43mRNA的表达水平。