长白山野生软枣猕猴桃总黄酮提取纯化及抗氧化性研究

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长白山野生软枣猕猴桃作为天然的药食同源的野果资源,不仅富含VC和实用纤维素、糖类、氨基酸等各种营养元素,还含有一定的黄酮类等功能活性成分,对其展开较为深入的研究,不仅有益于开发野果资源,更为研发长白山野生软枣称猴桃药食兼用的产品提供理论支撑,具有重要的科研价值。目前,我国对长白山野生软枣猕猴桃中总黄酮的提取开发尚不完善,对其抗氧化作用方面的深入研究鲜见报道,科学研究与产品开发仍有很大的空间。本试验对长白山野生软枣猕猴桃总黄酮提取分离纯化,并通过HPLC对不同采摘期的提取物进行鉴定以及对最适宜采摘期软枣猕猴桃黄酮提取物抗氧化活性进行了系统研究,获得如下结论:(1)以总黄酮得率为考察指标,最终确定响应面优化超声波-微波协同提取的最佳工艺条件为:液料比25:1(mL/g)、液料比25:1(mL/g)、超声功率350W、超声时间7 min、微波功率360 W、微波时间336 s,以上最佳条件下做了3次重复试验验证,在此条件下总黄酮得率可达到(7.33±0.002)%。(2)对四种不同型号的大孔吸附树脂进行对比,分析同条件下各自的吸附率与解析率,最终选用AB-8树脂适合纯化野生软枣猕猴桃。将浓度为0.3150 mg/mL的样品液50 mL湿法装柱,以1.0 mL/min流速进行吸附,待上样完毕后,用70mL的水洗除杂,然后使用70 mL的70%的乙醇以2.0 mL/min进行洗脱。在此最优的纯化条件下测得总黄酮的纯度为81.43%。(3)根据最佳的提取工艺与最优纯化条件,对不同采摘期的野生软枣猕猴桃果实中总黄酮含量及纯度进行对比分析,选择9月份的采摘期为最理想的试验材料,进一步研究抗氧化活性。(4)通过HPLC对不同时期采摘的野生软枣猕猴桃黄酮纯化物的主要成分对比分析,由此可知芦丁、芸香糖苷、槲皮素及异鼠李素类物质包含在野生软枣猕猴桃总黄酮里面。(5)研究9月份的纯化前后的软枣猕猴桃总黄酮的抗氧化活性,与浓度相同VC分别进行试验。纯化后的软枣猕猴桃黄酮对DPPH自由基的IC50为0.024 mg/mL,VC的IC50为0.049 mg/mL,表明在对DPPH自由基的清除效果方面,软枣猕猴桃黄酮的清除率要高于VC;通过对清除率曲线的对比分析可发现,纯化后的洗脱液对OH自由基的清除能力优于VC溶液;纯化后软枣猕猴桃黄酮对O2-自由基的IC50为0.039 mg/mL,VC的IC50为0.021 mg/mL,清除能力差于VC,但始终高于纯化前粗提液对O2-自由基的清除能力。由此可知经过纯化后,软枣猕猴桃中的黄酮对DPPH、OH及O2-自由基的清除作用有所提升,可以很好的替代VC。
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