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本文从海洋红藻——江篱菜中筛选到一株产褐藻胶裂解酶的菌株C25，进行了菌株鉴定，发酵条件优化，粗酶提纯和酶学特性研究，获得了该褐藻胶裂解酶的各项性能参数等有价值的信息，为今后进一步开展该酶的改造、生产与应用奠定了理论基础。在此基础上利用此酶裂解褐藻胶得到褐藻胶寡糖，对产物的结构进行了初步的探讨分析。
1.菌株的分离筛选及鉴定经过富集培养和分离纯化，获得了产褐藻胶裂解酶的菌株C25。经形态学观察、生理生化特征研究及16S rDNA序列比对，结果表明该菌属于副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)菌株。
2.发酵条件优化通过单因子试验和正交试验，在摇瓶条件下对菌株的碳源、氮源、盐度、无机盐、培养温度、pH、接种量等产酶条件进行了优化，得到了菌株的最适产酶条件。培养基组成：褐藻酸钠0.6％，硫酸铵0.3％，磷酸氢二钾0.7％，NaCl 3.5％；培养条件：起始pH值7.5，接种量10％，培养温度25℃，培养时间72 h，摇瓶转速200 rpm/min，装液量20 mL/50 mL。在上述条件下酶活可达到85.33 U/mL。
3.粗酶提纯
按优化条件发酵生产的褐藻胶裂解酶粗酶液，经硫酸铵初步盐析、DEAESepharose Fast Flow离子交换和Sephardex G-100分子筛层析，褐藻胶裂解酶粗酶液被提纯21.10倍，比活力达到745.10 U/mg，得率为59.26％。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PALGE)显示为一条带，表观分子量为40 kD。
4.纯酶特性
酶的最适反应pH为7.2，最适反应温度为30℃；6.4～8.0范围内，酶的酸碱稳定性较好，0～40℃范围内的热稳定性较好；以褐藻酸钠为底物的米氏常数Km值为150.16μg/mL。Ca<2+>、Mg<2+>和NH<,4><+>对酶活性有一定促进作用，但Zn<2+>、Cu<2+>、Fe<2+>、Mn<2+>、Al<3+>、Fe<3+>、Ni<2+>、Co<2+>和EDTA对酶活性抑制；Na<+>对酶活作用随其浓度变化而变化；有机溶剂乙醇、丙酮和丙三醇对酶活均有抑制，甲醇对酶活有轻微激活；变性剂DTT和尿素对酶活都表现为抑制；离子型表明活性剂SDS对酶活有抑制作用，而非离子型表面活性剂Tween-80对酶活的影响随其浓度的升高而变化：低浓度时，表现为激活性，高浓度时，激活作用消失，并出现轻微的抑制作用。
5．酶解产物
酶解的褐藻胶寡糖经过Sephadex G-25凝胶层析柱分离，初步纯化。不同降解时间得到的寡糖产物有所区别，利用薄层色谱(TLC)和电喷雾质谱(ESI-MS)对最终产物的组分及分子量进行了分析，主要为聚合度分别为2、4、5的褐藻胶寡糖；核磁共振光谱(<13>C-NMR)分析结果初步确定了产物主要表征基团的化学位移，推断该褐藻胶裂解酶至少具有一个G酶解位点，即该酶具有古罗糖醛酸的特异酶解专一性，寡糖产物中存在非还原端上C<,4.5>带有双键的古罗糖醛酸二糖，推断古罗糖醛酸二糖是在酶解过程中所能识别最小寡糖片段中的特定结构。