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背景与目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)的特征是人中脑多巴胺能神经元选择性丧失,导致相应运动功能和非运动功能障碍,虽然开展了很多发病机制方面的研究,但到目前为止,多巴胺能细胞死亡背后的确切机制仍然不完全清楚。当PD患者出现症状时提示中脑多巴胺能神经元大部分已经坏死,而且很多PD患者早期症状并不表现为静止性震颤、肌强直等运动症状,而是以嗅觉减退、便秘、幻视等非运动症状为首发症状,这些非运动症状可持续数年后才出现运动症状,但这些非运动症状并不具有特异性,而且即使患者首发症状表现为运动症状,因运动症状并非PD所独有,也很容易与多系统萎缩、特发性震颤等疾病混淆。目前PD的诊断主要还是依据临床表现,缺乏实验室诊断标准。MicroRNAs(miRNAs)是一组小的非编码RNA,大约19-25个核苷酸大小,被证实参与了 PD病理过程,有研究报道血浆miR-19b、miR-29a、miR-29c可以作为PD生物标志物,但游离的miRNAs非常不稳定,很容易被核酸酶水解,这就限制了游离miRNAs作为PD生物标志物的使用。外泌体是近年来发现的在细胞间通讯起着越来越重要作用的纳米大小的双层膜状结构,是细胞外囊泡(Extracellular Vesicles,EVs)的一种类型。外泌体可以将复杂的生物信息传递给受体细胞,从而通过它们的“分子货物”来调节受体细胞功能。目前在人的多种组织和体液中检测到它的存在,并且外泌体在体液中相当稳定,内含丰富的miRNAs,它不仅可以保护其中所含的miRNAs不容易被核酸酶水解,而且它还可以从多种体液中分离出来。因为具有上述这些优点,外泌体miRNAs可以作为疾病的诊断生物标志物。目前国内外鲜少见到外泌体miR-19b、miR-29a、miR-29c作为PD生物标志物的研究,本研究旨在探讨血浆外泌体miR-19b、miR-29a、miR-29c能否作为PD的生物标志物。方法:(1)收集2016年6月-2019年6月在解放军第960中心医院门诊诊断或住院病房收治的PD患者60例,根据入组前是否已经给予多巴胺能药物治疗PD,将患者分成服药组(drug组)和未服药组(nodrug组),其中drug组患者43例,no drug组患者17例,同期在体检科收集的性别与年龄配对的对照组病例60例(control组),采集血浆,收集各项基本资料及生化资料;(2)分离血浆外泌体,使用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)实验检测外泌体表面标志蛋白CD9和CD63;使用透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)观察外泌体形态;(3)提取血浆外泌体miRNAs,用逆转录实时荧光定量聚合酶链锁反应(reverse transcription-quantitativereal-time PCR,RT-qPCR)测定血浆外泌体 miR-19b、miR-29a、miR-29c 表达量;(4)使用MirPathv.3对目的miRNAs进行生物信息学分析(Tarbasev7.0)。结果:(1)miR-19b、miR-29c 在 PD 组和 no drug 组表达均下调(p<0.05),miR-29a在PD组、drug组和no drug组表达下调(p<0.01);(2)ROC曲线分析示miR-19b在PD组、drug组和nodrug组的AUC值分别为0.630(95%CI:0.528-0.731;灵敏度 85%,特异度 45%)、0.602(95%CI:0.492-0.711;灵敏度 81.4%,特异度 46.7%)、0.700(95%CI:0.581-0.819;灵敏度 94.1%,特异度45.0%);(3)ROC曲线分析miR-29a在PD组、drug组、no drug组的AUC值分别为0.854(95%CI:0.783-0.924;灵敏度 91.7%,特异度 73.3%),0.866(95%CI:0.795-0.937;灵敏度 95.3%,特异度 73.3%),0.823(95%CI:0.730-0.915;灵敏度 94.1%,特异度 65.0%);(4)ROC曲线分析miR-29c在PD组、drug组和no drug组的AUC值分别为0.647(95%CI:0.546-0.747;灵敏度 88.3%,特异度 46.7%)、0.613(95%CI:0.503-0.722;灵敏度 86.0%,特异度 3 1.7%)、0.732(95%CI:0.603-0.862;灵敏度 82.4%,特异度 60.0%)。(5)相关性分析示:在PD组中,Hoehn-Yahr(HY)分期与miR-19b相关(r=0.27,P=0.039);HY 分期、统一帕金森病评定量表(Unified Parkinson’s Disease Rating Scale,UPDRS)(Ⅲ)评分和尿酸(Uric Acid,UA)与miR-29c的表达量相关(r=0.36,P=0.005;r=0.37,P=0.003;r=-0.49,P=0.000)。在 control 组中,相关性分析示尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)与 miR-19b 相关(r=-0.43,P=0.001)。(6)生物信息学分析示:根据 Diana-miRPathv3.0(选择 Tarbasev7.0,P<0.05)3个miRNAs相关通路的交集涉及到的通路与PD可能相关的通路包括细胞外基质受体相互作用、p53信号通路、FoxO信号通路、PI3K-Akt信号通路等。结论:(1)miR-19b、miR-29a、miR-29c均可能作为PD诊断有潜力的生物标志物,并且miR-19b和miR-29c可能与病情严重程度相关;(2)3个miRNAs可能通过细胞外基质受体相互作用、p53信号通路、FoxO信号通路、PI3K-Akt信号通路等参与到PD的发病过程中。本研究为诊断PD提供新的研究方向,为临床早期诊断PD提供了实验基础,并且相关的生物信息学为进一步开发治疗靶点奠定了基础。