犬自体骨髓间充质干细胞介导HA-TCP修复牙槽缺损的实验研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wuxinxinwu
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目的:本实验旨在体外分离培养、纯化扩增成年犬骨髓间充质干细胞(MSCs),从基础理论研究方面进一步讨论MSCs的生物学特性、在一定条件下诱导其定向分化为成骨细胞;同时应用组织工程学原理研究MSCs介导羟基磷灰石磷酸三钙(HA-TCP)修复犬牙槽骨缺损,为牙槽骨缺损的细胞学治疗及骨髓间充质干细胞构建组织工程化骨提供一定的实验参考。   方法:   1、用密度梯度离心贴壁培养法分离纯化成年犬的MSCs。   2、倒置显微镜下观察MSCs形态,利用MSCs分化特性间接鉴定MSCs。   3、体外分别加自行配制的成骨诱导剂、成脂诱导剂,成骨诱导14d做碱性磷酸酶、茜素红组织化学染色,成脂诱导21d做苏丹Ⅳ组织化学染色。   4、将诱导的成骨细胞加在羟基磷灰石磷酸三钙(HA-TCP)支架上培养5天,扫描电镜观察。   5、取三只成年犬的876678为受试牙,在受试牙根分歧处制备骨缺损,缺损的长宽高均为3mm。   6、采取左侧受试牙为实验组:以成年犬MSCs作为种子细胞,与HA-TCP复合植入犬牙槽骨缺损部位:右侧受试牙为对照组:将HA-TCP植入牙槽骨缺损部位。移植后8w将实验动物处死,对植入部位进行HE染色,对图像进行测量并进行统计分析。   结果:成年犬MSCs呈均一的成纤维细胞样,具有一般干细胞的形态特点;经成骨诱导14d后出现碱性磷酸酶强阳性,局部出现矿化结节,茜素红染色阳性;经成脂肪诱导21d后苏丹IV染色阳性:扫描电镜下MSCs在HA-TCP上生长增殖良好;复合材料植入牙槽骨缺损8w,HE染色图像分析试验组牙槽骨生成率明显高于对照组p<0.01有统计学意义。   结论:   1、密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化成年犬MSCs,用此种方法培养的细胞具有MSCs的一般生物学特性。   2、MSCs体外诱导培养可分化成骨细胞,成脂细胞。   3、MSCs介导HA-TCP修复成年犬牙槽骨缺损优于单纯的HA-TCP修复犬牙槽骨缺损。工程
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