目的:探讨骨髓间充质干细胞（BMMSCs）联合常温机械灌注（NMP）对大鼠DCD供肝质量的影响及其作用机制。方法:用贴壁法提取BMMSCs。夹闭胸主动脉热缺血30min获取心脏死亡捐献（DCD）供肝。在体外建立稳定的大鼠NMP系统,供肝根据不同的保存方式,将实验分为4组:正常（Normal）组,静态冷保存（SCS）组,NMP组,BMMSCs联合NMP组,保存时间最长为8 h。模拟DCD供肝氧化应激损伤,建立体外IAR20细胞氧化应激损伤模型,与BMMSCs共培养6 h。采用生物化学方法检测肝脏流出道灌注液的肝功能;HE染色观察肝组织病理学改变;透射电镜观察线粒体超微结构;TUNEL或Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况;免疫荧光检测CD14、CD68和髓过氧化物酶（MPO）的表达情况;免疫组化染色及Western blot检测肝脏组织内皮素-1（ET-1）、内皮型一氧化氮合酶（e NOS）、诱导型一氧化氮合酶（i NOS）、血管性血友病因子（v WF）、细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管间黏附分子-1（VCAM-1）、JUN N端激酶（JNK）、p-JNK（Thr183/Tyr185）、NF-κB（p65）、p-NF-κB（Ser36）、AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）α、p-AMPK（Thr172）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）和p-ACC（Ser79）的表达情况;ELISA检测下腔静脉灌注液中的ET-1、一氧化氮（NO）、ICAM-1、VCAM-1、TM和PAF的水平;MDA、GSH检测氧化应激水平;DCFH-DA荧光探针法检测细胞ROS水平;JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位水平。结果:与SCS比较,BMMSCs联合NMP和单纯NMP能显著改善DCD供肝肝功能和肝脏组织学损伤,减轻肝细胞凋亡。进一步发现:1.BMMSCs联合NMP可改善DCD肝脏微循环:改善肝脏ET-1/NO平衡和微循环灌注,与SCS相比,BMMSCs联合NMP显著抑制肝内ET-1、i NOS、NO的表达,促进e NOS的表达（P<0.05）;抑制巨噬细胞活化和细胞间黏附,改善内皮细胞损伤,与SCS比较,BMMSCs联合NMP显著下调肝脏巨噬细胞CD14和CD68的表达,抑制肝内ICAM-1和VCAM-1的表达和v WF的表达,且作用优于单纯NMP（P<0.05）。2.BMMSCs联合NMP能减轻DCD肝脏氧化应激损伤,改善肝细胞线粒体损伤和提高线粒体膜电位功能（P<0.05）,并且BMMSCs联合NMP明显优于单纯NMP;BMMSCs联合NMP可显著抑制JNK-NF-κB通路减轻氧化应激,促进AMPK激活保护受损的线粒体（P<0.05）,进而改善大鼠DCD肝脏氧化应激损伤和线粒体功能;细胞模型中,BMMSCs可显著减少体外IAR20氧化应激模型中细胞损伤,抑制IAR20细胞活性氧（ROS）的释放,改善细胞线粒体损伤,提高线粒体膜电位水平,BMMSCs显著下调氧化应激模型IAR20细胞JNK-NF-κB信号通路,促进AMPK激活,再次验证了BMMSCs发挥保护作用的机制。结论:在供肝短缺的形势下,提高DCD供肝质量是扩大可用供体库的有效方法。本研究证明:BMMSCs联合NMP可更有效改善DCD供肝质量,并通过以下机制发挥保护作用:（1）抑制巨噬细胞活化和细胞间黏附,改善窦内皮损伤及微循环灌注;（2）抑制JNK-NF-κB通路减轻DCD供肝氧化应激损伤,促进AMPK激活改善线粒体损伤和线粒体功能而发挥保护作用。BMMSCs联合NMP对DCD供肝的保存为提高DCD供肝质量提供了有效的新方法,为临床DCD供肝的使用提供了基础实验依据。