背景：阴虚体质是由于先天禀赋和后天环境持续影响,在生长发育和衰老过程中形成的以阴虚内热为主要特征的一种偏颇体质。阴虚体质的主要特征可以概括为以下五个方面①形体特征：体形多瘦长;②心理特征：性情多活泼好动、急躁外向；③常见表现：手足心热,平时易口燥咽干,口渴喜冷饮,面色潮红,有烘热感,舌红少津少苔,两目干涩,视物模糊,眩晕耳呜,鼻微干,唇红微干,皮肤偏干,易生皱纹,脉象细弦或数,大便干燥,小便短,睡眠差；④发病倾向：平素易患阴亏燥热的病变,或病后易表现为阴亏症状；⑤对外界环境的适应能力：平素不耐热邪,不耐燥邪,耐冬不耐夏。有研究发现,在不同健康状态的人群中,中医体质分布特征存在明显差异。已经有相当多的流行病学研究证实阴虚体质与糖尿病、失眠、中风、高血压、骨质疏松等疾病具有一定的相关性。阴虚质、痰湿质、湿热质、血瘀质及气郁质人群亚健康状态构成比明显高于非此类体质者。气郁质是形成亚健康状态的重要危险因素。四种偏颇体质(阴虚质、湿热质、血瘀质、气郁质)发展为亚健康状态的相对危险度分别是平和质的1.618倍、1.585倍、1.611倍、1.891倍。而平和质则是一种保护因素。由此我们推测,阴虚质与健康状态有着密切的联系,长期的阴虚体质有向病理状态转化的可能。因此筛选出阴虚体质人群并提前给予干预有着未病先防的重要意义。不仅能够缓解阴虚体质症状,更主要的是能够预防亚健康、阻止相关疾病的发生,保持健康状态。因此,我们设计了对具有阴虚体质的健康人进行中药干预的随机、对照、开放的临床试验,同时应用代谢组学进行阴虚质代谢紊乱的机制研究,探索阴虚体质的代谢特点,及给予六味地黄丸干预前后阴虚体质代谢的变化情况。代谢组学是对生物系统因病理生理或基因改变等刺激所致的动态多参数代谢应答进行定量测定的一门学科。它强调把人作为一个完整的系统来研究,通过测定生物体系受刺激或扰动后其代谢产物的变化或其随时间的变化来研究该生物体代谢网络在疾病和药物作用下的变化。而这种思维模式正好与中医理论的整体观不谋而合。应用代谢组学有可能找出机体健康状态转化过程中的特定阶段,并量化其代谢产物,更加有利于对于中医“证”的理解,并施加干预。由于代谢组学从整体上反映生物体的功能水平与中医的整体思想高度趋同,并且代谢组学在整体研究的同时可以做到精细测量,这正是中医学证候概念无法从微观上解读、难以突破的关键问题所在,而代谢组学研究方法为从微观解读中医证候提供了可能的方法。使强调整体论的中医和强调还原论的西医找到了共通的契合点,而作为系统生物学重要组成部分的代谢组学就成为了连接两者的桥梁。前期有研究发现,气虚质与平和质人群血浆中对分类贡献较大的特异性代谢物有11个,包括甜菜碱、脯氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、组氨酸、丙氨酸、烟酰胺核苷酸、异亮氨酸、门冬氨酸、肌醇。这些差异代谢物与脂肪酸代谢、三羧酸循环、鸟氨酸循环、氨基酸代谢、丙酮酸代谢、糖异生、丙氨酸循环、肌醇代谢、嘌呤嘧啶代谢、氨回收、神经递质传导、甘氨酸和丝氨酸代谢等多个代谢通路相关。因此,我们推测,同样作为偏颇体质的阴虚质也存在代谢紊乱,因此我们筛选出健康阴虚质并纳入平和质作为对照,探索阴虚质的代谢特征。并应用六位地黄丸对健康阴虚体质进行体质调理,探索药物干预前后阴虚质的代谢变化情况。目的：1、明确六味地黄丸及生活方式调理对阴虚质及阴虚质人群健康状态的影响,为应用中医药手段干预中医偏颇体质提供科学依据。2、探索阴虚质血浆代谢组学特征及相关差异代谢产物。3、探索六味地黄丸对阴虚质代谢的影响及相关机制。方法：1、阴虚质中药干预研究。应用中医体质量表、健康促进生活方式量表、健康自测及体检报告进行健康与体质状况判断,与志愿者进行一对一面谈并采用中医四诊合参,进一步筛选健康人单纯阴虚质,并将其随机分为阴虚质干预组及对照组。干预组应用六味地黄丸干预1个月并结合中医综合体质调理方案继续体质调理,对照组仅给予中医综合体质调理方案。随访1年,观察不同干预方式对入组对象的主要疗效指标(阴虚质转化分),次要评价指标(健康促进生活方式得分)及健康状况的改变,通过统计分析主要及次要疗效指标,以明确应用中药调理阴虚质的临床疗效,为应用中医药手段干预中医偏颇体质提供科学依据。2、阴虚质与平和质代谢组学研究。从参加论文第二章临床实验的人群中筛选出阴虚质,并纳入平和质作为对照。清晨空腹抽血后提取血浆-20℃冻存,进行代谢组学特征分析后,进一步对其结果进行生物信息学分析,建立代谢组差异代谢图谱库。3、六味地黄丸干预阴虚质前后代谢组学研究。从参加论文第二章临床实验的人群中筛选出阴虚质人群,对其用药前后的血浆代谢组进行比较分析,清晨空腹抽血后提取血浆-20℃冻存,进行代谢组学特征分析后,进一步对其结果进行生物信息学分析,建立代谢组差异代谢图谱库。4、汇总代谢组学数据进行分析,采用MestReNova 5.3软件进行代谢图谱预处理,对各分段积分值进行归一化处理。所得数据输出并转换到Excel格式并导入软件Simca-P 12.0.1.0 (Umetrics AB, Sweden)中进行多元统计分析。采用主成分分析(Principal Component Analysis, PCA)和偏最小二乘法判别法(Partialleast-squares discriminant analysis, PLS-DA)进行分析,为强化组间差异,进一步采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)。分析结果以得分图(Scores plot)的形式表示。统计分析软件采用SPSS 13.0。对血浆中的几种代谢物的归一化积分值(X±S表示)做统计学处理,在OPLS-DA模型中提取VIP值(variable importance in projection, VIP),选取VIP值>1的化学位移值,进一步对这些化学位移值的归一化积分进行统计学分析(两独立样本t检验),提取P<0.05的化学位移值进行差异代谢产物成分鉴定。通过人类代谢产物数据库(http://www.hmdb.ca)及查阅文献来鉴定其代谢产物名称,初步探讨六味地黄丸干预阴虚质代谢紊乱的机制。结果：1.六味地黄丸干预阴虚质的临床观察研究通过初步调查、面谈、体检筛选出自愿入组的健康阴虚质研究对象68例,其中2例在研究过程中退出,最后完成观察共66例(干预组和对照组各33例)。分析结果：主要评价指标：组间比较,在入选基线时期两组的阴虚体质转化分并无明显差别(F=0.1,P=0.753),在给予药物干预1月后阴虚体质转化分即出现了明显下降,与对照组相比有明显差异(F=5.560,P=0.021),随后的两次随访6月、12月两个时间点内干预组与对照组相比较差异仍具有显著性(F=4.095, P=0.047、F=5.687, P=0.020)。组内比较,干预组干预前与1月、6月相比差异有显著性(P=0.020、P<0.001),一年后干预组的阴虚体质转化分较干预之前明显下降(44.60±11.75、29.36±15.39,P<0.001),而对照组1月与6月、12相比差异有显著性(P=0.005、P=0.007)。而且干预组与对照组在干预方式与时间上存在交互效应(F=3.084,P=0.029),说明两组的干预效果随着时间的延长变化趋势有所不同。从干预组干预前后体质转化分差值来看,干预组与对照组相比均有统计学差异(F=5.906、P=0.018, F=5.437、P=0.023, F=5.841, P=0.019)。组内比较,干预组阴虚体质转化分呈持续性下降(F=5.144,P=0.008),而对照组的阴虚体质转化分在干预一个月后仍有小幅度上升,干预6个月后才开始出现下降,但下降幅度仍小于干预组(12.31±16.63、3.70±13.20,P=0.023)。与对照组相比,干预1个月后,干预组在身体、脸部发热症状方面有所减轻(F=4.700、P=0.034)。干预后6个月,与对照组相比,干预组手脚心发热,口渴喜饮症状有所改善(F=7.135, P=0.010、F=5.289, P=0.025)。干预后12个月,与对照组相比,干预组皮肤、口唇干燥,口渴喜饮症状有显著改善(F=8.526, P=0.005、 F=6.031, P= 0.017)说明干预方式的不同,干预效果有差异,干预组效果要优于对照组。次要评价指标：(1)其余各体质转化分：特禀质转化分组间差异有显著性(F=5.411,P=0.023),提示干预效果随着干预方式的不同有差异。其余各体质转化分组间、组内差异均无显著性(P>0.05),这与体质学说中关于个体体质具有的较稳定的特质这一论断相吻合。(2)健康促进生活方式得分：干预组健康促进生活方式得分随着时间的推移有上升趋势,差异有统计学意义(F=3.983,P=0.024),干预前与1月、12月相比,6月与12月相比差异有显著性(P=0.042,P=0.008,P=0.033),说明干预组的生活方式得到了一定程度改善。从图1-2中可以看到两组的健康促进生活方式得分均呈现上升趋势,并且干预组的上升趋势在给予药物干预的1月时间内较为明显,随后开始进入一个平缓的上升阶段。从健康促进生活方式各维度来分析①自我实现：各时间点组间差异无显著性。干预组各时间点之间相比差异无显著性,对照组干预前与1月相比差异有显著性(P=0.042),有小幅度下降,但随着生活方式干预时间的延长,又恢复到基线水平。②健康责任：两组在组间及组内各时间点相比差异均无显著性,说明给予干预后,两组人员对于自身健康状况的关注程度保持在一个良好水平。③运动锻炼：在给予干预后干预组的运动锻炼得分呈上升趋势,干预前与12月相比差异有显著性(P=0.028),提示干预组对于运动、健康的重视程度及执行逐渐提升。④营养摄取：经干预后,两组对于营养摄入、饮食搭配等方面的认识度有所提高,干预组干预前与12月相比,对照组干预前与6月相比差异有显著性(P=0.001,P=0.034)。⑤在人际关系、压力管理等维度,两组在组间及组内各时间点相比差异均无显著性,说明给予干预后,两组人员在人际关系、压力管理方面均保持在一个良好水平。2.六味地黄丸及生活方式干预对阴虚质健康状态的影响干预组自测健康评分转化分在开始干预一个月后即有所上升,差异有显著性(P=0.019),而对照组则无明显变化。从图1-3中我们可以看到两组的自测健康评分转化分在开始干预后到第6月的时间内均较前有所上升,从6月开始至12月之间自测健康评分转化分有小幅度下降,但是得分水平仍较干预前高。对此我们的解释是,自测健康评分转化分是从心理、生理、社会等三个方面综合评估健康状况,在体质转化得分、健康促进生活方式得分变化趋势相符的情况下(随着健康促进生活方式得分的升高,阴虚体质转化分下降),自测健康评分转化分变化趋势与之并不十分吻合,这提示我们健康状况除体质情况、生活方式之外仍有其他影响因素,如考试、人际交往困难、家人患病等压力性事件所造成的心理压力有关。进一步对各个维度进行分析,(1)自测生理健康转化分：各时间点组间差异无显著性,组内分析,干预组干预前月与1月、6月、12月相比差异具有显著性,(P=0.017,P<0.001,P=0.029)。对照组各个时间点差异均无显著性。①身体症状：干预组在给予药物干预一月后身体症状方面即有所改善,干预前与1月、6月相比差异有显著性(P=0.029,P=0.004)。对照组各时间点差异均无显著性。②器官功能：干预组干预前与]月、6月、12月相比差异有显著性(P=0.012,P=0.007,P=0.001),对照组干预前与6月、12月相比差异有显著性(P=0.014,P=0.024),在给予干预后干预组及对照组均显示出了干预效果,干预组起效较对照组早。③身体运动功能：干预组在给予干预后在运动功能方面有了一定改善,干预前与12月相比差异有显著性(P=0.015),对照组干预前与1月相比差异有显著性(P=0.023)。(2)自测心理健康转化分：组间差异无显著性(F=0.031,P=0.861)；不同时间点差异无显著性(F=0.145,P=0.913)；不同干预方式与时间之间无交互效应(F=0.370,P=0.748)。在认知功能维度两组不同的干预方式与时间之间存在交互效应(F=3.201,P=0.027),提示干预方式的不同随着时间的推移干预效果有所不同,干预组干预前与12月相比差异有显著性(P=0.039)。(3)自测社会健康转化分：干预组在不同时间点差异有显著性(F=3.450,P=0.034),干预组内,干预前与1月、6月、12月,差异均有显著性(P=0.041,P=0.047,P=0.028),对照组各时间点之间差异无显著性(F=0.339,P=0.797)。①社会资源：干预组在不同时间点差异有显著性(F=3.443,P=0.020),干预前与1月、6月、12月相比差异有显著性(P=0.011,P=0.023,P=0.015)。②社会支持：干预组干预前与6月相比差异有显著性(P=0.017)。3.阴虚质与平和质血浆1 HNMR分析从论文第二章临床实验的健康阴虚质人群中筛选出阴虚质18人,并纳入平和质10人,采集清晨空腹血液样本进行代谢组学检测,应用分析软件对图谱进行分析,采用PCA方法对阴虚质及平和质样本建模,累计计算出7个主成分,模型参数R2X=0.641, Q2X=0.256,模型分析了64.1%的原始数据。阴虚质及平和质之间有所分离趋势,但仍有重合,进一步采用PLS-DA方法进行分析。最终计算出4个主成分,模型参数R2X=0.436, R2Y=0.99, Q2X=0.775。基于阴虚质与平和质血浆代谢数据建立OPLS-DA模型,最终计算出5个主成分,模型参数R2X=0.906, R2Y=0.874, Q2X=0.349。可见阴虚质与平和质之间可明确区分。阴虚质与平和质血浆中对分类贡献较大的特异性代谢物24个,包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸、脂类、赖氨酸、瓜氨酸、脯氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、乙酰乙酸、γ-氨基丁酸、3-羟基异戊酸、柠檬酸、天冬氨酸、肌酸、酪氨酸、乳酸、苏氨酸、胆碱、β-葡萄糖、不饱和脂肪酸、甲基组氨酸。这些差异代谢物与脂肪酸、长链脂肪酸代谢、三羧酸循环、氨基酸代谢、糖异生、丙氨酸循环、类固醇合、神经传递成等多个代谢通路相关。4.六味地黄丸干预组用药前后血浆代谢组学研究从论文第二章临床观察的阴虚质人群中筛选出药物干预前后阴虚质16人,进行用药前后血浆代谢组学分析,应用分析软件对图谱进行分析,采用PCA方法对干预组用药预前后样本建模,累计计算出5个主成分,模型参数R2X=0.938, Q2X=0.751,模型分析了93.8%的原始数据。干预前后样本有分离趋势但仍未完全分开,进一步采用PLS-DA模型进行分析。最终计算出4个主成分,模型参数R2X=0.524, R2Y=0.996, Q2X=0.832。可见干预组在药物干预前后的样本可显著区分。最后采用OPLSDA筛选差异性代谢产物,最终计算出4个主成分,模型参数R2X=0.744, R2Y=0.917, Q2X=0.296。干预组用药前后血浆中对分类贡献较大的特异性代谢物包括脂类(极低密度脂蛋白)、2-羟基异丁酸、赖氨酸、胆固醇、脂类、脯氨酸、糖化蛋白、谷氨酸、谷氨酰胺、蛋氨酸、γ氨基丁酸、3-羟基异戊酸、α-酮戊二酸、丙酮酸、2-羰基异己酸、柠檬酸、酪氨酸、甜菜碱、胆碱、肌醇、α-葡萄糖、三磷酸甘油酸、丝氨酸、乳酸、β-葡萄糖、不饱和脂肪酸、甲基组氨酸。多为糖、脂肪、蛋白质三大营养能量代谢过程的中间产物,与脂肪酸代谢、三羧酸循环、丙酮酸代谢、糖异生、类固醇合成、嘌呤嘧啶代谢、鞘脂类代谢、磷脂合成代谢、甘氨酸和丝氨酸代谢、神经递质传导等多个代谢通路相关。5.生活方式干预阴虚质血浆代谢组学研究从论文第二章临床观察的阴虚质人群中筛选出药物干预前后阴虚质20人,进行用药前后血浆代谢组学分析,应用分析软件对图谱进行分析,采用PCA方法对干预组用药预前后样本建模,累计计算出8个主成分,模型参数R2X=0.927, Q2X=0.705,模型分析了92.7%的原始数据。对照组干预前后样本有分离趋势但仍未完全分开,进一步采用PLS-DA模型进行分析。最终计算出4个主成分,模型参数R2X=0.921, R2Y=0.866, Q2X=0.472。可见样本可显著区分。最后采用OPLSDA筛选差异性代谢产物,最终计算出4个主成分,模型参数R2X=0.921,R2Y=0.866, Q2X=0.637。血浆中对分类贡献较大的特异性代谢物包括醛固酮、胆固醇、前列腺素E1、异亮氨酸、脂类(主要是低密度脂蛋白)、糖化蛋白、胆碱、精氨酸、氧化三甲胺(TMAO)、甲醇、β-葡萄糖、牛磺酸、α-葡萄糖、甘油,丙三醇、亮氨酸、丙酰甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、乳酸、3-羟基丁酸、不饱和脂肪酸。多为糖、脂肪、蛋白质三大营养能量代谢过程的中间产物,与脂肪酸代谢、三羧酸循环、丙酮酸代谢、糖异生、类固醇合成、甘氨酸和丝氨酸代谢、神经递质传导等多个代谢通路相关。结论：1.六味地黄丸及生活方式都可以起到改善阴虚质的相关症状,对生理健康也可以起到调理作用,但是生活方式的调理需要长期坚持才能起效,联合药物调理起效更快,效果更好。2.与平和质相比阴虚质血浆内与能量、脂肪代谢、三羧酸循环相关的氨基酸、脂类、糖等代谢产物明显升高,可能为阴虚质内热表现、形体瘦长的物质基础。3.与平和质相比阴虚质血浆内涉及到神经传递的氨基酸水平有所上升,提示阴虚体质有可能存在某种程度的神经细胞抑制与兴奋功能的失衡,而这种失衡有可能是阴虚质喜动恶静,性格活泼开朗、失眠等表现的机制之一。4.在给予六味地黄干预后阴虚质血浆中与三羧酸循环相关的脂类、蛋白、氨基酸、糖类均有所降低。说明六味地黄丸对阴虚质的能量代谢紊乱有一定的调节作用,从而对于阴虚的手脚心发热,口唇、皮肤干燥,口渴喜饮等症状有所改善。