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目的:构建酸敏感离子通道3(Acid-sensing ion channels 3,ASIC3)基因干扰质粒,验证重组质粒干扰效率,并获得sh-ASIC3慢病毒;建立小鼠转移皮肤癌痛模型并行sh-ASIC3慢病毒鞘内注射处理,研究ASIC3在转移皮肤癌痛模型小鼠中的作用。方法:利用GenBank获取ASIC3基因序列合成相应干扰序列,通过T4 DNA连接酶将ASIC3基因片段连接至环状Plko.1-Puro载体上,获得重组干扰ASIC3质粒(sh-ASIC3),通过转染三种神经细胞(PC12、N2a、BV2),运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blotting)验证sh-ASIC3质粒干扰效率。随后将重组质粒转染293T细胞获取sh-ASIC3慢病毒,运用实时荧光定量PCR技术检测病毒滴度。于健康雌性Balb/c小鼠左后趾皮下注射小鼠乳腺癌细胞(4T1),数量约2×10~5个,建立小鼠转移皮肤癌痛模型。建模成功后运用完全随机数字表法将小鼠进行分组处理,各组小鼠分别在接种4T1后隔天测量小鼠热缩足反射潜伏期(Paw Withdrawal Thermal Latency,PWTL),在接种4T1癌细胞成功的小鼠第9天按实验分组行鞘内及局部注射慢病毒处理,随后隔天行PWTL测试,比较慢病毒处理前后PWTL阈值的变化。慢病毒处理13天后采用脊髓离断法处死小鼠,获取L4-5脊髓背根神经组织。运用免疫组化技术检测脊髓背根神经(dorsal root ganglion,DRG)中ASIC3的变化。结果:菌液PCR结果提示ASIC3干扰序列插入载体成功,测序结果表明干扰质粒ASIC3的插入序列与Genbank标准序列完全一致;RT-PCR及Western blo tting检测结果表明,三种神经细胞中mRNA转录水平及蛋白表达量sh-ASIC3慢病毒感染组较sh-EGFP慢病毒感染组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);小鼠左后趾皮下注射4T1癌细胞后,接种侧出现明显红肿及活动障碍,PWTL测试阈值较正常组缩短,且RT-sqPCR及Western blotting结果提示接种4TI癌细胞小鼠DRG中ASIC3表达量较正常组明显增高;皮肤癌痛小鼠行鞘内注射sh-ASIC3干扰慢病毒处理后较肿瘤局部注射sh-ASIC3干扰慢病毒及鞘内注射sh-E GFP干扰慢病毒组PWTL测试阈值明显增高,小鼠DRG中ASIC3免疫组化结果同样与PWTL结果一致。结论:成功构建sh-ASIC3慢病毒干扰质粒;皮下注射乳腺癌细胞的雌性小鼠PWTL较正常小鼠明显缩短,且ASIC3表达量同时增高,表明成功建立皮肤癌痛模型小鼠,并说明ASIC3介导小鼠皮肤癌痛的产生;鞘内注射sh-ASIC3慢病毒可提高癌痛小鼠PWTL阈值,免疫组化结果进一步佐证了其机制可能与ASIC3表达的下调有关。