氨苄青霉素（AMP）是β-内酰胺类抗生素的一种，属于半抗原，为广谱抗生素；另外，AMP还具有促进动物生长的作用，因此在畜牧业养殖中常被用作饲料添加剂或用于动物乳腺炎等疾病的防治，从而使动物源性食品中含有超标的AMP残留，严重危害了人类健康。建立一种准确、快速、简便的氨苄青霉素残留检测方法是十分必要的。本研究首先通过制备高质量的氨苄青霉素全抗原，免疫Balb/c小鼠，制备高亲和力、高特异性的抗AMP单克隆抗体。在此基础上，初步建立氨苄青霉素ELISA检测技术。（1）首先采用生理学法、EDC法、戊二醛法、NHS+EDC法、BS3法和SMCC六种方法将AMP与BSA、OVA和KLH三种载体蛋白偶联，合成完全抗原。采用紫外扫描法和SDS-PAGE凝胶电泳法对偶联效果进行了鉴定。（2）将合成的抗原开展免疫原性分析，其中③号小鼠血清效价达到了2×105，③号小鼠血清敏感性最好，其抑制率达到了86.2%。选择③号小鼠利用杂交瘤技术制备单克隆抗体，共筛选出3株杂交瘤细胞株，分别为2C3、4E5和4C7。其中2C3杂交瘤细胞分泌抗体的性质稳定，效价也较高，用其制备腹水，大量制备单抗。纯化后2C3单抗蛋白浓度为9.51mg/ml，腹水效价为4×105，亚型为IgG1，IC50值可达到9.3ng/ml，与载体蛋白BSA、KLH以及除青霉素类以外的抗生素均无交叉反应。（3）初步建立了间接ELISA方法检测AMP的试验条件，灵敏度和最低检测线分别为9.37ng/ml和0.82ng/ml。