背景和目的 糖尿病肾病是终末期肾病的一个重要原因。它的发生率在不同的糖尿病人群中有很大区别。有一些患者长年处于高血糖状态而未发生糖尿病肾病，而另一些糖尿患者虽然血糖控制较理想仍较早地发生了糖尿病肾病。有研究认为糖尿病肾病的发生与遗传因素有关，醛糖还原酶(AR)基因很可能是糖尿病肾病的候选易感基因。国外的研究发现1型糖尿病肾病患者外周血单个核细胞(PBMC)中AR基因的表达水平明显上升；过度表达AR基因的转基因小鼠对多元醇介导的并发症的易感性增加。据此推测，组织AR的过度表达可能是糖尿病微血管并发症的重要因素。本课题用RT-PCR方法定量观察2型糖尿病患者外周血单个核细胞(PBMC)中ARmRNA的表达情况，观察其与糖尿病肾病的关系。 研究对象和方法 2型糖尿病的诊断参照1997年美国糖尿病协会(ADA)提出的、1999年WHO建议的诊断和分型标准，病人来自浙江大学医学院附属第一医院内分泌科住院和门诊就诊者。排除标准是：糖尿病确诊前已有高血压；糖尿病急性并发症；明确的心、肝、肺及非糖尿病性肾病等疾病；急、慢性感染；恶性肿瘤等。入选病人共54例(男30例，女24例)，平均年龄 浙江大学硕士学位论文 63．ZWll．38岁（41岁一82岁），汉族，无亲缘关系。根据 24小时尿白蛋白 排泄量（UAE）将病人分为3组：l、正常白蛋白尿组（GZ＊32例（男18 例，女14例），尿白蛋白排泄量（＊址）＜3om令24h；2、微量白蛋白尿组 （q）：10例（男6例，女4例），＊肪＊30m g／2g／24h且＜300m g／2g／24h；3、大 量白蛋白尿组（G。卜12例（男7例，女5例LUAE＞300m令24h。正常 对照组（GI）：共35例（男19例，女16例），平均年龄（59．217．29）岁， 汉族，为浙江大学医学院附属第一医院常规体检正常者，无糖尿病及高血 压家族史，彼此间无亲缘关系。糖尿病各组患者均接受口服降糖药／和胰岛 素治疗，伴有高血压、高血脂的患者接受相应的降压、降脂药物治疗。 所有实验对象取隔夜空腹肘静脉血3ml，0．SM EDTA抗凝，以Ficoll 淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，Trizol液提取总 RNA，再以 Randon Primer 为引物将所有mANA逆转录成cDNA。最后以cDNA为模板，用PCR法 同管扩增 AR mRNA cDNA和卜actin cDNA，它们的引物分别为：AR上游 引物序列：5 AAC TAC AGC CCA GGT CCT GAT 3’，下游引物序列：5 GGG TAA TCC TVI’G TGG GAG GTA 3，共 204hp；p－actin上游引物序列： 5’AAC TAC AGC CCA GGT CCT GAT 3，下游引物序列：5’GGG TAA TCC TTG TGG GAG GTA 3，共 349hp。PCR结果用 1．7％arogase电泳后以 IsJ 多功能凝胶成象仪定量扫描条带灰度，AR条带与相应p刁ctin条带 进行对比得到 Am卜actin m洲A的比值。 统计方法：计数资料用卡方检验；计量资料用X士S表示，2组间计量 资料用t检验，多组间计量资料用单因素方差分析和单因素协方差分析， 多组间两两比较用a＂den卜Newman－Keuls法进行，P＜0刀5为差异显著性标 准（双侧）。 结 果 一、二型糖尿病组与正常对照组各临床指标及 PBMC中 AR mMA的 2 浙江大学颀士学位论文 表达量 糖尿病组患者的空腹血糖（FPG）（9．47士2．31。OW）显著高于正常 对照组O．72上0．58 mrnoffeX P功刀5，两组间的年龄、血压、血肌研、血脂 无显著性差异。 糖尿病组 PBMC中 M mRNA的表达量（0．74士 0．66）显著高于正常 对照组（0．29士0．10），P—0．009。 二、2型糖尿病各亚组的临床指标及 PBMC中 AR mRNA的表达量 各亚组间的年龄、病程、血压、血脂及糖化血红蛋白水平无显著性差 异。SCf，G4显著局于＊、GZ、G3组叩均＜0刀5），GI、GZ、G3。组之 间无统计学差异；FPG，GZ、G3、G4显著局于GI组（P＜0．05），GZ、G3、 G。三组之间无统计学差异。 四组PBMC中 AR nRNA的结果：GI组：0．29士0．10；GZ组：0．54士 0．39：G3组：0．73土0．39；G4组：1．47士1．02。GZ、G3、G4组显著高于＊ 组（P＜0刀1）；G。显著高于GZ、G3组（P＜0刀1）；G3组与G。组之间无显著 性差异。四组间总体差异显著，民组显著高于前三组，F二9．7124，P＜0刀1。 排除 FPG及 SCr影响后的协方差分析结果显示 AR mRNA在组间仍有显著