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目的:回顾性分析我院近5年就诊的甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid cancer,PTC)术后患者复发转移的高危因素,通过研究狐猴酪氨酸激酶-3(Lemur tyrosine kinase-3,LMTK3)基因沉默后对PTC细胞恶性生物学行为的影响,探讨LMTK3与PTC复发转移相关因素,如血清促甲状腺素(ThyroidStimulating Hormone,TSH)之间的关系,发掘临床价值。方法:1.收集2014年1月至2018年12月在遵义医科大学附属医院就诊的PTC术后符合纳入标准的患者共438例。回顾性分析PTC术后复发转移与肿瘤大小、淋巴结转移及甲功指标TSH等的相关性。2.运用qRT-PCR检测PTC细胞系K1及IHH4中LMTK3表达量是否具有差异,并筛选出LMTK3高表达的细胞株进行后续实验。3.在mRNA水平上探究LMTK3可能参与的PTC细胞恶性生物学调控信号通路。带荧光、抗性的慢病毒沉默LMTK3基因(shLMTK3)后稳转入实验细胞株中抑制细胞LMTK3表达。根据基因敲降程度不同,将实验分为以下3组:慢病毒沉默组(shRNA-LMTK3),空载慢病毒对照组(shRNA-Control)及空白对照组(Blank Control)。应用荧光显微镜观察感染后细胞荧光表达情况,qRT-PCR检测实验组及对照组转染效率。稳转后运用qRT-PCR探究本实验相关基因LMTK3、RelA及NF-κB1 mRNA表达量变化。4.从RNA-seq技术获得shLMTK3转录组基因差异性表达的数据,分析LMTK3对PTC发生、发展可能的调控方式及与PTC术后复发转移高危因素TSH的关联。结果:1.单因素分析示:肿瘤最大径、淋巴结转移及首次碘131治疗与手术时间间隔和PTC术后复发转移具有一定相关性,差异有统计学意义(P<0.05),而与患者年龄、性别及伴发甲状腺合并症差异无统计学意义(P>0.05);多因素回归分析示:肿瘤大小和淋巴结转移是PTC患者术后复发、远处转移的独立危险因素(分别为P=0.020及P=0.026)。同时TSH在复发转移患者血清中表达水平较高,差异具有统计学意义(P=0.018)。结果说明肿瘤最大径>1cm和(或)淋巴结转移、血TSH值>0.1mIU/L的患者易发生术后复发转移。2.LMTK3在K1细胞mRNA水平表达量明显高于IHH4细胞,差异具有统计学意义(P=0.009)。因而选用LMTK3高表达的K1细胞株进行后续实验。3.慢病毒沉默LMTK3感染K1细胞,荧光显微镜下观察感染前后细胞形态变化不大,感染72h后荧光表达量达80%以上,初步转染成功。稳转72h后qRT-PCR检测结果显示shRNA-LMTK3组LMTK3 mRNA表达量均低于两对照组(分别为P=0.030,P=0.042),但shRNA-Control组及Blank Control组表达量无统计学意义(P=0.094)。因此推测空载慢病毒载体对K1细胞影响不大,没有统计学差异,后续实验将以shRNA-LMTK3组和shRNA-Control组展开。NF-κB1和RelA mRNA表达量在shRNA-LMTK3组与shRNA-Control组差异无统计学意义(分别为P=0.189,P=0.393),说明LMTK3可能对NF-κB1/RelA不具有直接调控作用。4.从2.6万个基因中筛选出211个差异性表达基因,包括122个表达上调基因和89个表达下调基因。通过KEGG信号通路富集性分析,慢病毒沉默LMTK3基因在K1细胞中通过与相关靶位点结合,不仅上调TNF信号通路,还导致cAMP通路的下调(P<0.05)。GO功能富集表达下调基因中,β-catenin靶位点受到LMTK3明显调控(P=0.013)。结论:1.肿瘤直径大小、颈部淋巴结转移、TSH水平是PTC术后复发转移高危因素,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.Wnt/β-catennin信号通路可能参与LMTK3对K1细胞的调控。3.LMTK3可能通过下调cAMP或上调TNF信号通路影响TSH与TSHR结合,促进PTC复发转移。