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将编码Goose parvovirus(GPV)HG5/82株病毒衣壳蛋白的基因分为三个有部分重合的基因片断,它们分别是从VP1的5’-端到662位核苷酸,从VP2的5’-端到969位核苷酸及从VP3的3’-端到864位核苷酸的基因片段,这三个片段的两个重合区分别包含了VP2-VP3非重合区和VP3的中部,再分别将这三个基因片断连入原核表达系统中进行表达,并将它们相应的表达产物命名为F1、F2、F3。前期工作已经完成了F2的原核表达纯化、抗血清的制备及其免疫活性的检测。 本研究将VP1的5’-端到662位核苷酸和从VP3的3’-端到864位核苷酸的基因片段分别连入原核表达载体pPROEXTMHTb和pET30a中,将构建的重组质粒进行确证性序列测定。再把这两种重组质粒分别转化入大肠杆菌DH5α和BL21,用IPTG诱导后分别表达出与预期大小相符的约32kDa和34kDa的融合蛋白。将它们分别命名为F1和F3,通过薄层扫描分析显示F1表达量最多可占工程菌菌体总蛋白的22.8%。分别诱导两种工程菌后用6mol/L盐酸胍裂解,再经超声处理后离心,用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化,用于分别制备F1和F3的兔抗血清。Western blot结果表明:F1的抗血清不但能与F1反应还能与亲本株GPV HG5/82的两条蛋白带发生反应,这两条蛋白带的分子量分别为88kDa和77kDa,它们的大小分别与GPV VP1和VP2的相对分子量相同;F3的抗血清不但能与F3反应还能与亲本株GPV HG5/82的四条蛋白带发生反应,这四条蛋白带的分子量分别为88kDa、77kDa、65kDa和60kDa,其中分子量为88kDa、77kDa和60kDa的蛋白带分别与GPV的三种结构蛋白,即VP1、VP2和VP3的分子量一致。该结果证明融合蛋白F1和F3与F2一样具有良好的免疫原性。由于GPV三种结构蛋白具有共同的羧基端,因此在理论上,存在于VP3的表位应该也存在于VP1和VP2;存在于VP2的抗原表位应该也存在于VP1。通过分析F1、F2和F3的兔抗血清与亲本株的Western blot结果,初步对GPV HG5/82株VP蛋白的B细胞线性抗原表位进行定位:VP1的第145~198位和220~733位氨基酸残基中含有B细胞线性抗原表位,第198~220位氨基酸残基之间没有B细胞线性抗原表位。 本研究为定位GPV VP蛋白的抗原表位及开发研制抗鹅细小病毒感染的基因工程疫苗和诊断试剂提供依据。