【摘 要】
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水蛭肽(hirulog)是模仿天然水蛭素设计合成的肽类凝血酶抑制剂，是一种极具潜力的抗(溶)栓药物。 经过文献查新，我们设计并合成了一段长度为100bp的DNA序列作为目的基因片段，
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水蛭肽(hirulog)是模仿天然水蛭素设计合成的肽类凝血酶抑制剂，是一种极具潜力的抗(溶)栓药物。 经过文献查新，我们设计并合成了一段长度为100bp的DNA序列作为目的基因片段，克隆进载体pBluescript-M13后进行了核苷酸测序及物理图谱的绘制。 本研究选用了近年来日益被国际上认可的巴斯德毕赤酵母作为基因表达系统，分泌型质粒pPIC9为载体。首先以质粒pBluescript-hir为模板，PCR反应扩增含目的基因的片段hir-1，hir-1经限制型内切酶SnaB Ⅰ和Not Ⅰ酶切后与经同样酶切处理的pPIC9连接，形成重组质粒pPIC9-hir。把pPIC9-hir用Bgl Ⅱ酶切线性化后电穿孔转化入巴斯德毕赤酵母GS115。经筛选得到his~+Mut~s表型的阳性克隆WY-3。小规模地培养WY-3后进行目的蛋白——水蛭肽前体的诱导表达，用Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析诱导液。水蛭肽前体是含有31个氨基酸，分子量为3.3kD的小肽。 研究过程中还进行了不同型号电转化仪的使用比较；蛋白酶抑制剂的研究；诱导表达过程中不同培养基的比较；以及凝胶电泳染色方法的比较。 通过本研究，构建了酶切图谱正确的重组质粒pPIC9-hir，筛选出了阳性克隆菌株，探索了电穿孔基因转化的条件和目的蛋白的诱导表北京化工大学硕士学位论文达与分析过程中的相关技术手段。关键词:水蛙肤，巴斯德毕赤酵母，基因重组，诱导表达
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