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micro-15/16/195/424/497家族miRNAs的功能涉及细胞分化、增殖和凋亡,在生命正常的生理和病理过程中起到广泛的调控作用。它们在癌症、心血管疾病和精神疾病等疾病的检测、预后及治疗方面均具有重要意义。miR-195是该家族中的一员,由于其在多种癌症病变组织中显著下调表达而一直被视为抑癌基因,加之对于心脏肥大和心率衰竭和在精神疾病中的调控作用而被广泛关注。它的调控作用涉及众多与细胞周期和细胞增殖相关的靶基因,在许多生物学过程中不可或缺。miR-195不是骨骼肌特异表达的miRNA,但本实验室研究已证明它在骨骼肌发育、细胞分化过程中仍扮演着重要的角色(Huang et al.,2008)。本研究对miR-195的靶基因及其在细胞增殖过程中的调控作用进行研究,取得的主要结果如下: (1)利用TargetScan和PicTar软件对miR-195的靶基因进行预测,选择与细胞周期和个体生长相关的候选靶基因Ccne1、Ccnd2、Igf1r、Igf2r、Insr和Ghr构建3‘UTR双荧光素酶报告载体。双荧光素酶活性检测和western blot实验证明Ccnd2和Ccne1是miR-195和miR-497的靶基因,而Igf2r和Ghr不是miR-195的靶基因。 (2)分别采取2d,2w,4w,6w日龄小鼠的腿肌,并收集分化0d,1d,2d,4d的C2C12细胞,利用Q-PCR对miR-195或miR-497的表达量进行分析。结果显示miR-195和miR-497在小鼠骨骼肌发育过程(2d,2w,4w,6w)和C2C12细胞分化过程(0d,1d,2d,4d)中呈上调趋势。但miR-195上调倍数更高,骨骼肌发育6w与2d相比上调10倍,而miR-497上调5.8倍。C2C12分化6d与未分化相比,miR-195上调2.5倍。 (3)C2C12细胞中过表达miR-195之后,细胞中处于G1期的细胞与对照细胞相比比例显著增大(P<0.05),处于S期的细胞比例则显著低于对照细胞(P<0.05),说明miR-195抑制细胞的增殖。