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研究背景：黑色素瘤是常见的皮肤肿瘤，是人类皮肤癌中恶性程度最高的肿瘤之一，其发病率占全部恶性肿瘤的1％～3%，并呈现明显的上升趋势。尽管目前出现了免疫治疗疗法治疗黑色素瘤，但效果总不如人意。目前有关于肿瘤的微环境涉及到许多不同的概念，其中黑色素瘤细胞所面对的免疫耐受被大家所关注。CD47是一个分布较广的膜受体，属于免疫球蛋白家族。CD47和巨噬细胞表面表达的调节蛋白 a(SIRPa)之间的交联转导信号抑制巨噬细胞的吞噬功能。过表达CD47可能是癌细胞逃脱巨噬细胞带来的天然免疫的一种结果。CD47在多种肿瘤上高表达，如血液肿瘤、膀胱癌和淋巴癌等，而抗 CD47的单克隆抗体通过与巨噬细胞表面的 SIRPa结合来抑制肿瘤的增殖和迁移，但是除了SIRPa，CD47还能与 TSP1、干扰素等结合，参与机体正常的生理功能，因此抗CD47单克隆抗体是否能同时阻断CD47与这些因子的结合并引起不良反应一直存在争议。目前，有关CD47与黑色素瘤的报道较少，而转入siRNA-CD47进入肿瘤细胞降低 CD47的表达来治疗肿瘤具有一定的优势。目前转染核酸大多用病毒和非病毒载体，其中非病毒载体在转染细胞过程中不但可以克服病毒载体带来的副作用外，而且还有毒性低，易于应用等特点。本团队前期研究发现叶酸修饰的聚轮烷衍生物（FPP，由聚乙二醇、环糊精、聚乙烯亚胺和叶酸构建组成），能有效包载阿霉素逆转乳腺癌MCF耐药（阿霉素）细胞株，并且有效地诱导其凋亡。但不知是否能包载siRNA-CD47有效转入，诱导黑色素瘤的凋亡考察。 研究目的：探讨 CD47在黑色素瘤中的表达情况；探讨叶酸修饰的聚轮烷衍生物(FPP)传递siRNA-CD47抑制黑色素瘤增殖的作用，从而为黑色素瘤的治疗提供依据。 研究方法：采用 Western blot、RT-PCR检测临床黑色素瘤患者病灶组织 CD47的表达；马尔文粒径仪、扫描电镜检测FPP(siRNA-CD47: CD47)纳米粒的物理性能；克隆形成实验检测 FPP(CD47)纳米粒对肿瘤细胞克隆增殖的影响；侵袭实验检测FPP(CD47)对黑色素瘤的侵袭影响；荷瘤小鼠实验体内检测FPP(CD47)对肿瘤增殖的影响。 研究结果：临床黑色素瘤患者CD47显著高表达于对照组。当N/P=14时，粒径为80 nm，电位10 mV，FPP(CD47)构建成最佳的物理性能的纳米粒。与未处理组和FPP(Con)相比，FPP(CD47）治疗组中CD47的蛋白表达显著降低，其中荧光强度显著性减少到4.2%。FPP(CD47)作用的荷瘤小鼠瘤体积显著减少了90%，并且降低瘤中CD47的蛋白和mRNA表达。然而，在体外实验中，FPP(CD47)抑制黑色素瘤细胞的增殖、侵袭与FPP(Con)相比却没有显著变化（P>0.05），其中克隆实验显示FPP(CD47)组的克隆反而增大。 研究结论：FPP传递siRNA-CD47转入肿瘤细胞能够有效抑制黑色素瘤的大小。