乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)简称乙脑,是由流行性日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种蚊媒性的人畜共患病。猪是JEV最主要的易感动物,一般呈散发、隐性感染。JEV感染可引起怀孕母猪流产和公猪的急性睾丸炎或不育等,给养猪业带来了较大的经济损失。因此,控制猪JE流行不仅可以减少养猪业的损失,而且对人类的健康具有重要意义。为了解JEV的遗传进化关系,本论文对临床分离的1株JEV野毒株JEV/sw/HN-2/2009基因组进行RT-PCR扩增与序列测定,得到10977 bp的基因组序列。将JEV分离株JEV/sw/HN-2/2009与GenBank公布的34株JEV参考毒株的全基因及E基因的核苷酸、氨基酸序列相似性进行比对分析。结果表明,JEV分离株JEV/sw/HN-2/2009的基因组核苷酸、氨基酸序列与基因Ⅲ型JEV减毒活疫苗株SA14-14-2的相似性最高,分别为99.7%和99.6%。35株JEV分属于5个不同的基因型,JEV分离株JEV/sw/HN-2/2009与疫苗株SA14-14-2均位于基因Ⅲ型的分支,亲缘关系较近。同时,应用MegAlign软件分析JEV分离株JEV/sw/HN-2/2009与疫苗株SA14-14-2核苷酸及氨基酸位点的差异。结果表明,JEV分离株JEV/sw/HN-2/2009的3′-UTR第10701位插入一个碱基G,JEV分离株与疫苗株存在31个核苷酸和13个氨基酸位点差异,氨基酸位点差异主要分布在NS2b及NS5蛋白区。为研制出更有效、更适合规模化生产的猪用JE疫苗,本论文利用猪源JEV分离株JEV/sw/GZ/09/2004在Vero细胞上增殖,并对病毒增殖条件和扩大培养条件进行了系统优化,培养出了大量高滴度病毒液,转瓶培养的病毒TCID50达到107.6/mL,为疫苗的制备奠定了基础。通过对病毒液的灭活、乳化条件的优化,我们成功制备了稳定性好的JEV/sw/GZ/09/2004株油乳剂灭活疫苗。为了更好的评估JE疫苗的免疫效力,本论文初步建立了JEV对本体动物(猪)的感染模型,结果表明,JEV/sw/GZ/09/2004感染仔猪后,可引起体温升高至41℃左右,呈稽留热,精神沉郁并偶尔伴有神经症状。感染仔猪剖检主要表现为脑、脑膜和脊髓膜充血,淋巴结、睾丸不同程度肿大,睾丸、附睾充血发炎。感染仔猪病毒血症主要出现在JEV感染后3~7天,并且部分感染仔猪出现抗体转阳现象,此模型的建立为疫苗的免疫效力评估奠定了基础。JEV/sw/GZ/09/2004株油乳剂灭活疫苗的免疫效力试验表明,疫苗免疫猪在试验第7周还保持着较高的抗体水平,且抗体水平优于市售的减毒活疫苗,表明本论文制备的猪JE灭活疫苗具有良好的免疫原性,安全性好,有很大的应用前景。