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目的：探讨沉默Rock2基因对人肝癌细胞增殖和凋亡作用的影响；分析Rock2对下游蛋白Cdc25A的调节作用及机制；阐明Rock2的上游作用激酶。最终明确Rock2基因在S期检查点中的信号通路作用及对肝癌细胞生物学活性的影响。方法：一、沉默人肝癌细胞Huh-7和HepG2中Rock2的表达，通过实时荧光定量PCR检测Rock2mRNA的表达水平；Western blot检测Rock2蛋白的表达的水平；MTT比色法检测沉默Rock2后对Huh-7和HepG2细胞增殖抑制的影响；流式细胞术检测沉默Rock2对Huh-7和HepG2细胞周期及早期凋亡的变化。二、Western blot检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒，稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中，Western blot检测Cdc25A蛋白表达变化；并针对Rock2干扰序列利用PCR定点突变技术进行碱基突变，构建Rock2突变质粒从而“恢复”Rock2表达，分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blot检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中Chk1/Chk2蛋白的变化，免疫共沉淀及免疫荧光共定位技术分析Rock2与Cdc25A的相互作用关系。并探索Rock2通过调节Cdc25A泛素化进而对其降解的机制。三、通过生物信息学技术分析Rock2结构并参考相关预测软件设计DNA损伤时被磷酸化位点的磷酸化多肽，制备相应特异性磷酸化抗体。Western blot检测电离辐射（IR）诱导DNA损伤时Rock2磷酸化位点。利用RNA干扰技术降低ATR/ATM的表达并造成DNA损伤时，Western blot检测Rock2磷酸化位点的变化情况。将Rock2突变体质粒转染到Rock2稳定低表达的肝癌细胞中并IR照射，观察Rock2突变体对肝癌细胞增殖的影响。结果：一、实时荧光定量PCR以及Western blot结果显示，沉默肝癌细胞系Huh-7和HepG2中Rock2表达后，Rock2mRNA以及Rock2蛋白的表达水平均明显下降；MTT结果显示，沉默Rock2表达后Huh-7和HepG2细胞与对照组细胞相比，增殖能力明显减弱（P<0.05）；流式细胞术检测结果发现，沉默Rock2表达后的Huh-7和HepG2细胞G0/G1期细胞比例明显升高，而S期和G2/M期细胞比例明显降低，与对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）；沉默Rock2表达的Huh-7和HepG2细胞，肝癌细胞的早期凋亡较对照组明显增加（P<0.05）。二、Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达，而且呈现正相关性。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后，Cdc25A蛋白表达明显下降；“恢复”Rock2表达后，Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1/Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用，免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。Rock2通过调节Cdc25A泛素化进而影响其降解。三、确定了IR诱导DNA损伤时Rock2的磷酸化位点S1121及上游作用激酶ATM，Rock2突变体影响肝癌细胞的增殖。结论：Rock2可以调节肝癌细胞的增殖及凋亡，而且，Rock2基因在S期检查点中发挥重要的信号调控作用，可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。