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本研究采用VM培养基作为筛选培养基,以本实验室保藏的135株菌株为筛选对象,以发酵液对高岭土悬液絮凝效果为指标衡量其絮凝活性及产絮凝剂能力,筛选到了1株絮凝活性高的菌株,编号为YH39,革兰氏染色阴性,有荚膜;将菌株YH39所测的16S rDNA序列在NCBI上进行BLAST,结果表明,YH39与洋葱伯克霍尔德菌有99%的相似性。
各种碳源、氮源中,葡萄糖为YH39产絮凝剂的最佳碳源,硝酸钾为最佳氮源,正交试验得出最佳培养基组合为:葡萄糖5g/L,NaCl5g/L,硝酸钾1.6g/L、D(o)bereiner-basic 10.0 mL/L,Fe(3)-EDTA(0.66%)1.0 mL/L。
培养条件对菌株YH39产絮凝剂的影响试验表明,培养液初始pn对絮凝活性的影响明显,产絮凝剂的最佳pH为6.0~7.0;在25~40℃的培养温度之间,温度不影响絮凝活性的最高值,但温度越高,达到最高絮凝活性所需的培养时间越短;其他最佳培养条件为:摇床转速180 rpm、装液量50mL、接种量0.2%~4%。
通过发酵动力学研究表明,菌株YH39的生长延迟期非常短,在发酵第4 h菌进入对数生长期,pH、溶氧迅速下降,菌体浓度和发酵液的絮凝活性也迅速增加;在发酵第l6 h,pH、溶氧开始回升,菌体浓度和絮凝活性也几乎达到最高值;菌生长的稳定期非常短,发酵第18 h,菌的生长进入衰亡期,菌体浓度下降很快,pH、溶氧继续回升。
絮凝剂的絮凝特性试验发现,絮凝剂主要分布在发酵上清液中,菌体本身几乎无絮凝活性;此絮凝剂在pH小于7.0的酸性废水中絮凝效果差,而在pH大于8.0的碱性废水中絮凝效果很好;此絮凝剂有很好的耐热性,在100℃下加热30 min,絮凝活性不改变;阳离子ca2+、Mg2+、A13+对絮凝活性有显著的促进作用,而Na+对絮凝活性没有影响,Fe2+反而降低絮凝活性;在100mL0.5%高岭土懋液中,浓度为0.2 MCaCl2溶液的最佳投加量为2 mL;在100mL0.5%高岭土悬液中,发酵上清液最佳投加量为1.5 mL。
利用有机溶剂提取絮凝剂,从1 L发酵上清液可提纯到0.733 g絮凝剂,把提取的絮凝剂稀释成1%浓度的溶液,溶液经紫外光谱扫描后,未发现在260nm和280nm有吸收峰,表明絮凝剂中不含蛋白质和核酸类物质,多糖和蛋白质呈色反应表明絮凝剂中含有糖类物质,不含蛋白质,所以确定此絮凝剂成分为多糖。紫外诱变后得到菌株YH39-12-52,其絮凝活性比出发菌株YH39提高约4.5%。经2次传代试验后,菌株絮凝活性稳定。
应用研究结果表明,此絮凝剂对三种印染废水均有很好的絮凝效果,不仅可以高效地降低废水的CODcr,还有很好的脱色效果。但相比较传统絮凝剂PAC或PAC+PAM,处理效果稍差。