【摘 要】
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目前国内外对超氧化物歧化酶(SOD)的研究,主要集中在动物组织、植物中提取的SOD,因动物体内SOD含量多,活性高,但是动物组织提取的SOD安全性低,含有致热因予等缺陷。而植物中SOD含
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目前国内外对超氧化物歧化酶(SOD)的研究,主要集中在动物组织、植物中提取的SOD,因动物体内SOD含量多,活性高,但是动物组织提取的SOD安全性低,含有致热因予等缺陷。而植物中SOD含量低。为了开发SOD含量多、活性高、缺陷少的资源丰富的原料,本文以条件温和、产品活性损失小、处理量大,分离步骤少,无有机溶剂残留等优点的双水相萃取分离法在黄粉虫、啤酒酵母和桑蚕蛹三种原料中,进行提取纯化SOD比较研究。
本实验确定了双水相筚取提取SOD工艺流程,研究了双水相体系最佳条件:提取黄粉虫和蚕蛹中SOD最佳双水相体系的质量组成为聚乙二醇浓度12%,磷酸钾浓度24%,pH7.1;提取啤酒酵母SOD最佳双水相体系的质量组成为聚乙二醇浓度10%,磷酸钾浓度24%,pH7.3。在此条件下测定出黄粉虫中提取的SOD比活力达到3.7 U·mg-1蛋白质,SOD纯化倍数达3.74,酶活性回收率达71%;啤酒酵母中提取SOD的比活力达到15.5 U·mg-1蛋白质,SOD纯化倍数达2.18,酶活性回收率达47.8%;蚕蛹中提取SOD的比活力达到102.0U·mg-1蛋白质,SOD纯化倍数达2.91,酶活性回收率达73.9%。综合SOD提取的比活力、酶活力回收率和纯化倍数三个因素考虑,本文认为蚕蛹是最佳原料。
采用SDS-PAGE法测定了SOD分子量:黄粉虫中提取的SOD分了量为33.2kDa;蚕蛹中提取的SOD分子量为31.0kDa;啤酒酵母中提取的SOD分了量为38.2kDa。并鉴定三种原料中提取的SOD都是CuZn-SOD。
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