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该研究采用大肠杆菌表达人视黄醇结合蛋白(RBP)以期能够利用重组蛋白替代天然蛋白制备单克隆抗体,建立RBP酶联免疫测定方法应用于临床首先对RBPcDNA序列进行了克隆和序列分析.由于编码RBP的基因含有内含子,所以采用从人HepG2细胞和人肝组织提取mRNA进行RT-PCR的方法扩增目的基因.利用T-载体克隆的方法将电泳回收的PCR产物直接克隆到pGEM-T载体,发现该方法简单、快速.采用双脱氧终止法进行DNA序列分析,结果显示所克隆的RBP cDNA与文献报道一致.随后,构建表达载体进行表达.克隆的RBP cDNA经EcoRI、BamHI酶切回收,亚克隆入带有P<,R>P<,L>启动子的原核表达载体pBV220,获得pBV220-hRBP表达载体,转化E .coli.DH5α,改变温度诱导表达.12%SDS-PAGE 分析显示新增一条分子量约2.1kDa的蛋白,与天然RBP大小一致. 该蛋白最佳诱导条件是42℃培养约5hr.对经SDS-PAGE分离的蛋白,采用Western印迹方法进行重组蛋白的免疫活性测定,发现重组蛋白能够与RBP抗血清特异地反应,说明RBP cDNA能够正确地转录翻译为具有天然RBP免疫活性的重组蛋白,可为今后制备抗血清和单克隆抗体提供免疫原,为建立ELISA方法提供抗原标准品.