【摘 要】
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目的:探究六种小分子化合物(six chemicals,6C)在无血清无滋养层条件下,对原代小鼠角膜上皮细胞增殖能力和细胞分化表型的影响,并以此开发构建组织工程小鼠角膜上皮植片。方法:原代小鼠角膜上皮细胞的培养基中添加不同的化合物组合,在经过传代/连续培养后,通过结晶紫染色、生长曲线和克隆形成效率评估原代小鼠角膜上皮细胞的增殖活性;通过免疫荧光染色和实时荧光定量PCR分析原代小鼠角膜上皮细胞和上皮
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目的:探究六种小分子化合物(six chemicals,6C)在无血清无滋养层条件下,对原代小鼠角膜上皮细胞增殖能力和细胞分化表型的影响,并以此开发构建组织工程小鼠角膜上皮植片。方法:原代小鼠角膜上皮细胞的培养基中添加不同的化合物组合,在经过传代/连续培养后,通过结晶紫染色、生长曲线和克隆形成效率评估原代小鼠角膜上皮细胞的增殖活性;通过免疫荧光染色和实时荧光定量PCR分析原代小鼠角膜上皮细胞和上皮-间充质细胞转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)相关基因的表达;在小鼠角膜上皮损伤愈合模型中,以6C组分溶液进行点眼处理,通过荧光素钠染色评估角膜上皮愈合速度;在空气暴露培养体系中添加不同小分子组分,通过对培养形成的角膜上皮植片进行免疫染色,评估植片中上皮细胞的生长和表型分化。结果:在长期培养以及传代培养中,6C复合物增加了原代小鼠角膜上皮细胞的增殖活性。在体实验显示6C能够加速小鼠角膜上皮伤口的愈合。同时,这种复合物抑制了 EMT相关标记物ZEB1/2、Snail、β-catenin和α-SMA等表达水平的增加,而与此同时,维持了原代小鼠角膜上皮细胞功能相关标记物p63、K14、Pax6和K12等的表达。6C复合物的这种保护作用表明,它可以通过延长功能性干/祖细胞活性的寿命来减少其向间充质细胞的转分化。此外,在空气暴露培养体系中添加6C复合物,可形成可用于移植手术的组织工程小鼠角膜上皮片。结论:6C复合物既抑制了原代小鼠角膜上皮细胞增殖活性的传代依赖性下降,又抑制了 EMT的增加。这些影响表明,这种新型6C复合物可能有助于改善角膜缘干细胞缺乏症的治疗。
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