红景天甙对人宫颈癌细胞系SiHa细胞增殖活性的影响

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目的:研究红景天甙对体外人宫颈癌细胞系SiHa细胞增殖活性的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:对人宫颈癌细胞系SiHa细胞进行体外培养;采用MTT细胞存活试验检测不同浓度的红景天甙处理SiHa细胞12h、48h和72h后,对SiHa细胞的存活率和增殖抑制率的影响,并计算IC50;倒置相差显微镜下观察不同浓度的红景天甙作用48h后SiHa细胞的形态学改变;应用流式细胞技术检测不同浓度的红景天甙作用48h后对Siha细胞周期分布和凋亡率的影响;Hoechst33258染色法观察不同浓度的红景天甙处理48h后SiHa细胞核的形态学改变;采用western blot法检测不同浓度的红景天甙对SiHa细胞周期相关蛋白(Cdc2、cyclinB1、CDK2和cyclinA)以及凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Fas、FasL和cleaved caspase-3)的表达水平的影响。结果:MTT结果显示红景天甙明显抑制人宫颈癌SiHa细胞的体外增殖(P<0.05),其作用呈明显的浓度-时间依赖性,计算24h、48h和72h的IC50分别为(107.42±1.44)μg/ml、(86.87±2.90)μg/ml和(76.98±1.74)μg/ml;红景天甙处理48h后,SiHa细胞的形态特征发生显著变化,且随着红景天甙浓度的增加而愈加明显;流式细胞技术结果表明,红景天甙影响SiHa细胞周期的分布,随红景天甙浓度的增加,Go/G1期细胞百分比逐渐降低而G2/M期百分比逐渐增加(P<0.05);此外,红景天甙还能诱导S期细胞的累积,除100μg/ml红景天甙组与对照组(0μg/ml)司无统计学差异(P>0.05)外,其余各浓度组与对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的红景天甙(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml和80μg/ml)作用后SiHa细胞凋亡率分别为:(8.55±0.54)%、(19.44±0.51)%、(42.52±0.61)%和(58.87±1.08)%,均明显高于对照组(1.67±0.51)%(P<0.05):Hoechst33258染色证实SiHa细胞凋亡,并可见典型的凋亡特征:western blot结果证实20μg/ml、40μg/ml和80μg/ml的红景天甙作用48h后,与对照组比较,细胞周期相关蛋白Cdc2、cyclinB1、CDK2和cyclinA的表达明显下调(P<0.05);此外,与对照组相比,红景天甙(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml和80μg/ml)作用后Bax、Fas和cleaved caspases-3的表达水平上调,(P<0.05),而FasL和Bcl-2的表达水平下调,除20μg/ml红景天甙组Bcl-2的表达与对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各浓度组与对照组间均具有显著性差异(P<0.05);另外,随着红景天甙浓度的增加,Bax/Bcl-2的比率增加,60μg/ml和80μg/ml红景天甙作用后Bax/Bcl-2的比率明显增加(P<0.05)。结论:红景天甙抑制体外人宫颈癌SiHa细胞的增殖活性,其作用机制可能与诱导SiHa细胞G2/M、S期阻滞和诱导细胞凋亡有关。
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