论文部分内容阅读
卵巢癌(Ovarian cancer,OC)由于发病进程迅速并且发病症状特征不明显,患者被确诊时多为晚期,再加上早期诊断难度大、易复发、易转移等,在妇科恶性肿瘤中死亡率极高。目前临床上卵巢癌主要的化疗药物为顺铂,但其副作用较多,如严重的消化道症状、肾毒性、骨髓抑制和神经毒性等。因此,寻找一种治疗效果好、副作用低的新药物来治疗卵巢癌变得极为迫切。大量研究报道发现,NF-κB在肿瘤细胞中一直处于激活状态,其可通过上调炎症因子(如TNF-α、IL-6等)的表达从而促进肿瘤的生长,而NF-κB抑制剂可以改善机体的抗肿瘤免疫反应。有研究显示,乳腺癌转移抑制因子1(BRMS1)能通过抑制NF-κB信号通路从而抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭。p38是MAPK家族中的重要一员,可被磷酸化活化并介导炎症的发生,进而影响下游的细胞周期调节蛋白以及凋亡相关蛋白等效应分子的活性,从而参与卵巢癌的增殖、侵袭、转移等。右旋美托咪定(DEX)是一种肾上腺素受体激动剂,在镇痛、镇静中发挥重要作用,但有研究发现,DEX既可以改善细胞的免疫功能又可以下调炎症因子的表达。因此,本课题主要探讨DEX对p38MAPK/NF-κB信号通路的抑制作用,以及对卵巢癌大鼠肿瘤生长和免疫功能的影响。将100只Fischer 344大鼠分为正常组和模型组,对模型组大鼠腋下注射卵巢癌细胞NUTU-19,待成瘤后对模型组大鼠腹腔注射不同浓度的DEX,正常组给予等量的生理盐水。结果显示,相比于模型组,DEX组大鼠腋下的肿瘤块明显缩小,肿瘤生长明显得到抑制;HE染色结果显示,与正常组相比,模型组卵巢癌组织中细胞胞浆丰满,核增大,核数增多,核仁深染,DEX组则出现了不同程度的斑片状坏死。通过IHC检测p38和NF-κBp65在卵巢组织及卵巢癌组织中的表达变化情况,发现模型组中p38和NF-κBp65的蛋白表达水平显著升高,DEX可显著降低其表达。进一步通过RT-qPCR和Western Blotting检测卵巢癌组织以及淋巴细胞,发现p38和NF-κBp65的mRNA和蛋白水平与IHC结果相似。通过ELISA检测卵巢癌大鼠血清发现,模型组血清中炎症因子IL-2、TNF-α浓度显著升高,DEX可显著降低IL-2、TNF-α在血清中的浓度水平。通过MTT法检测脾淋巴细胞转化率与活力发现,模型组脾淋巴细胞转化率与活力均显著降低,而DEX可显著改善上述指标。通过流式细胞仪检测大鼠外周血中T淋巴细胞亚群及细胞周期结果显示,模型组中CD4~+T及CD8~+T淋巴细胞的数目显著降低,处在S期的细胞数目显著减少,G0/G1期的细胞数目显著增加,而DEX可以调节T淋巴细胞亚群的比例,促进淋巴细胞增殖,且差异具有统计学意义。并且模型组T淋巴细胞的凋亡率较正常组显著升高,DEX可显著改善T淋巴细胞的凋亡。综上所述,DEX通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路降低卵巢癌大鼠血清中炎症因子IL-2、TNF-α的含量,从而抑制卵巢癌大鼠的肿瘤生长。同时,DEX还能促进脾淋巴细胞的转化、增殖,从而增强卵巢癌大鼠的免疫功能。DEX是临床应用较广泛的镇静药物之一,其副作用小,对肿瘤的生长有抑制作用,能增强机体的免疫功能,由于目前尚无有关DEX在卵巢癌中的作用的报道,因此,本课题通过研究DEX对p38MAPK/NF-κB信号通路的影响以及其在卵巢癌肿瘤生长和免疫功能的作用机制,为卵巢癌的治疗提供新思路。