种类繁多、数量庞大的肠道菌群构成了人体最为复杂的微生态系统。分子生物学和生物信息技术的发展以及大数据的应用,使得人们对肠道微生物的结构组成方面已经有了基本的认识了解。随着对肠道微生物研究的逐步深入以及粪菌移植在各疾病治疗中的应用,常需要大量的粪便样本,所以建立“粪便银行”也逐渐成为研究的方向。一方面,本文分析粪菌液制备条件和保存条件对粪菌微生物群落组成结构和菌群活性的影响,从而摸索出完善、有效的制备和保存条件;另一方面,研制出更能让患者接受的粪菌干粉胶囊,并分析在不同条件贮存后粪菌干粉胶囊菌群活性的变化。菌群结构组成和菌群活力与新鲜菌液是否保持一致是建立粪菌银行的至关重要的因素。本研究首先分析菌液制备条件对菌群活性的影响。将收集到的粪便样本分别在厌氧条件和好氧两种条件下制备菌液,7种培养基平板计数结果显示好氧条件制备的比厌氧条件制备的菌液低了 1～2个数量级;运用LIVE/DEAD细菌死活染色技术观察发现好氧条件下死菌细胞远远多于活菌细胞,而厌氧条件活菌细胞占据多数,说明厌氧条件能更好的保证活菌细胞数量及保证菌群活性。随后选取1 0%甘油混悬菌液和生理盐水混悬菌液两种保存方案分别在-80℃条件下贮存1、2、6个月比较贮存前后菌群活性的变化,平板计数结果显示,与新鲜菌液相比,10%甘油混悬菌液无论是贮存2个月还是6个月,菌群活性变化不明显;生理盐水组,1个月后与新鲜样品之间差异不大,贮存2个月后与新鲜样本之间的差异开始显现,6个月后差异越发明显,乳酸菌、拟杆菌以及大肠杆菌相比较新鲜菌液下降了近1个数量级;将粪菌液分别在4℃、-20℃、-80℃低温条件下贮存1、2、6个月,平板计数结果显示贮存1个月三种温度贮存条件与新鲜菌液差异不明显,随着时间延长,菌群在4℃条件贮存与新鲜菌液的差异逐渐显著;-20℃和-80℃条件下的菌群活性虽然随时间变化出现一定的降低但变化不明显。提取菌液的DNA,利用16S rDNA测序分析贮存前后的菌群组成结构的变化情况,结果显示4℃条件下贮存6个月后相比较新鲜菌液拟杆菌门降低了近30%,厚壁菌门增加了 20%左右,同时其他菌门也有所增加;-20℃、-80℃条件下的菌群组成结构与新鲜菌液基本一致,未出现明显差异。基于此研究结果,为粪菌银行的建立提供基础的贮存条件方面的参考。本研究创新性地利用真空冷冻干燥技术制备了粪菌干粉胶囊。利用培养计数方法和死活细胞染色结合激光共聚焦显微镜技术,分析了粪菌干粉胶囊的菌群活性,,结果表明无论是在-80℃、-20℃还是4℃条件下保存的粪菌干粉胶囊,随着贮存时间的增长菌群的死活比例与Oday时变化不明显;冻干后的粪菌干粉胶囊的贮存条件更加宽泛了,这为今后粪菌干粉胶囊商业化提供了一定参考价值。