【摘 要】
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目的:对猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因进行高效原核表达,对表达产物进行免疫反应性分析。方法:通过DNA自动合成仪,用固相亚磷酸酰胺法合成一段5’端有NdeⅠ内切酶位点,3’
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目的:对猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因进行高效原核表达,对表达产物进行免疫反应性分析。方法:通过DNA自动合成仪,用固相亚磷酸酰胺法合成一段5’端有NdeⅠ内切酶位点,3’端有XhoⅠ内切酶位点的猪囊尾蚴AF239799-1基因序列,并将其克隆到原核表达载体p ET28a(+)中,将其转入到感受态大肠杆菌BL21(DE3)中,经PCR、双酶切及基因测序鉴定,确定阳性克隆菌。用1.0m M IPTG对阳性克隆菌进行诱导表达,用SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)对表达产物进行鉴定,并用蛋白质印迹法对纯化后的重组蛋白进行免疫反应性分析。结果:合成的基因序列长度为1 053 bp,AF239799-1重组蛋白为370个氨基酸,理论分子质量、等电点分别为40.39 k Da和6.33;PCR、双酶切及基因测序鉴定结果显示,p ET28a(+)-AF239799-1重组质粒构建成功,并成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)中;重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中主要以包涵体形式表达;Western blot结果显示重组蛋白可被猪带绦虫病猪血清识别。结论:猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因可在原核表达体系中获得高效表达,表达产物具有免疫反应性。
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