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目的:目前为止牙周病是人类两大口腔疾病之一,而基质金属蛋白酶家族(matrix metalloproteinases, MMPs)及其抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)作为能导致牙周病发生的蛋白水解酶,今年来引起众多学者的研究。该蛋白水解酶的主要功能是通过分解细胞外基质(extracellular matrix, ECM)来实现的。研究表明在某些刺激因子的作用下,MMPs与TIMPs的比例超出正常值范围,而引起MMPs的过度分泌,促使细胞外基质过度降解。表现在牙周组织方面的破坏则成为造成牙周病的发生的原因之一。近年来,关于MMP-8及TIMP-1对牙周组织破坏作用的报道较多,但对其两者之间相关性的研究较少,本文将进一步研究牙周病中MMP-8、TIMP-1水平及与其两者之间比例的相关关系。本课题将实验人群分为牙龈健康组组、慢性龈缘炎组及慢性牙周炎组,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测各组人群龈沟液(gingival crevicular fluid, GCF)中MMP- 8及TIMP-1水平,分析GCF量、MMP- 8及TIMP-1水平在正常组、慢性龈缘炎组及慢性牙周炎组有无差异及其与牙周主要临床指标之间的关系,探讨MMP-8及TIMP-1作为牙周组织破坏和炎症程度客观指标的可行性。方法:1临床资料选择:选取到白求恩国际和平医院口腔科门诊就诊,同意参加本实验的人员作为研究对象,其中男22例,女26例,年龄22-56岁。采取系统牙周检查,根据1999年美国牙周病分类研讨会提出的慢性牙周炎的诊断标准,记录牙周临床指数,根据分类要求将实验人员分为牙周健康组、慢性龈缘炎组及慢性牙周炎组。其中牙周健康组16例,慢性龈缘炎组18例,慢性牙周病组14例,共48例。所有人员每人选择一颗符合实验条件的第一或第二磨牙作为受试牙,其中牙周炎患者毎牙选取牙槽骨吸收最重点为受试牙位,共48颗牙,即48个位点。采用重复取样的方法在所选牙位近中颊侧收集龈沟液,共48份。2龈沟液的采集:本实验选用滤纸条法收集龈沟液,将按2mm×10mm剪裁好的Whatman 3号滤纸条用电子天平称重,记录结果。选取实验人员合适牙位,将滤纸条插入所选取牙位的近中颊侧龈沟内,30s后取出,放入Eppendorf管内。一分钟后重复此操作,将重复取样所得的两个滤纸条放入同一个Eppendorf管内,再次称重,之后放入-20℃冰箱保存,待测量。3记录牙周主要临床指数:牙龈指数(gingival index, GI):根据L?e和Silness提出的标准,将GI分为0-3级。菌斑指数(plaque index, PLI):根据L?e和Silness提出的标准,将PLI分为0-3级。探诊深度(probing depth, PD):具体要求为用Williams刻度的牙周探针袋底到龈缘的距离。附着丧失(attachment loss, AL):即为釉牙骨质界到袋底距离。4使用成品MMP-8、TIMP-1试剂盒,采用ELISA法分别测定龈沟液中MMP-8、TIMP-1的浓度。结果:1实验结果记录三组人群牙周主要临床指数,并经统计学分析显示,差异具有统计学意义(P<0.05)。2牙周健康组龈沟液体积为0.68±0.22μl,慢性龈缘炎组为0.98±0.25μl,慢性牙周炎组为1.22±0.62μl。经统计学分析: P<0.05,差异有显著性,并且两两比较均有统计学意义,提示随所采集位点牙周组织的炎症情况的增加,龈沟内龈沟液的含量增加。3牙周健康组MMP-8平均浓度为0.62±0.09mg/L,慢性龈缘炎组为0.68±0.02mg/L,慢性牙周炎组为0.78±0.05mg/L。经统计学分析:P<0.05,差异有显著性,并且两两比较均有统计学意义,提示三组龈沟液中所含MMP-8的浓度总体不相等,即随所采集位点牙周组织炎症情况的增加,MMP-8的浓度增加。4牙周健康组TIMP-1平均浓度为3.55±0.93mg/L,慢性龈缘炎组为3.42±1.49mg/L,慢性牙周炎组为2.88±1.30mg/L。经统计学分析: P>0.05,提示三组龈沟液中所含TIMP-1的浓度总体无差别,并且两两比较均无统计学意义,即随所采集位点牙周组织炎症情况的增加,TIMP-1的浓度没有显著改变。5实验结果显示三组龈沟液中MMP-8/TIMP-1比值分别为0.16±0.06、0.23±0.09、0.32±0.15。经统计学分析:P<0.05,差异有统计学意义,提示三组龈沟液中MMP-8/TIMP-1比值随所采集位点牙周组织炎症情况的加重,MMP-8/TIMP-1比值增大。6实验结果记录各组牙周主要临床指数,并经统计学分析显示GCF中MMP-8浓度与PLI、GI、PD及AL均存在正的相关关系。结论:1随牙周病变的进展,所采集龈沟液的量明显增加,提示龈沟液的量能反应牙周病变的程度,因此可在判断牙周情况时作为参考指标之一。2实验可见随牙周病变程度的增加,龈沟液中MMP-8的水平明显提高,提示MMP-8的水平能反映牙周病变的程度,且MMP-8的检测简单易行,因此可考虑作为评价牙周炎症程度的参考指标。3结果分析显示随牙周组织炎症程度的增加GCF中MMP-8/ TIMP-1比值明显增加,提示该值在评价牙周炎症程度方面具有一定的临床价值。4 GCF中MMP-8浓度与GI、PLI、PD及AL经统计学分析存在相关关系,但结果显示表示关系密切程度的确定系数r~2的数值均不大,提示该种统计学关系密切性不是特别显著,即在评价牙周炎症程度方面价值不大。