前言 胎膜早破（PROM）作为病理产科情况之一日益受到产科工作者的重视，对它的研究也不断向深度和广度发展，但至今其病因和发病机制尚未完全明了，这为临床工作中有效预防PROM带来了极大的困难。目前已知，主要由胶原纤维构成的羊膜是胎膜抗张性的主要来源，因此在妊娠过程中任何影响胶原纤维完整性、弹性和韧性的因素均可导致胎膜的破裂。近年的研究主要集中在感染等因素对羊膜的破坏上，但对羊膜本身发育成熟过程中的影响因素却研究甚少。赖氨酰氧化酶（LOX）能氧化胶原纤维中的赖氨酸残基，从而启动胶原纤维间交联的形成，是胶原纤维发育成熟的关键酶，微量元素铜（Cu）是LOX的活性基团。本研究正是检测了50名原因不明PROM孕妇及50名非PROM孕妇血清Cu含量、羊膜Cu及LOX含量和羊膜中Ⅲ型胶原含量，以比较两组间的差异，同时探讨这些因素之间的相关关系，深入揭示Cu及LOX在羊膜发育成熟过程中的作用。 资料与方法 一、资料来源 选择2003年1月至2003年8月在中国医科大学附属第二临床医院产科住院分娩PROM患者50例，其中妊娠37～42周孕妇20例，34～36⁺⁶周孕妇20例，28～33⁺⁶周10例，各病例在临床上无感染征象，同时羊膜标本HE染色每高倍视野不多于4个中性粒细胞，均为25～35岁、初产、单胎头位、阴式分娩、无其他产科合并症及并发症、近期无外伤和性交等明显诱因。选择与以上各孕周相对应的符合上述条件的非PROM孕妇50例作为对照组，足月前分娩者均为自然早产。两组孕妇年龄和孕周间进行比较，差异无显著性（p＞0.05）。 二、主要试剂 Amplex Red过氧化氢检测试剂盒由美国Molecular Probes公司提供； 大鼠抗人111型胶原抗体由武汉博士德公司提供; p一氨基丙睛富马酸盐、1，5一戊二胺由天津百美生物科技有限公司提供。 三、实验方法 1、标本采集和处理:抽取孕妇空腹肘静脉血2血离心留血清，置一20℃冰箱保存待测血清Cu含量。分娩后分别取0.5一1.鲍和59新鲜羊膜组织，洗去附着血块及羊水，置一80℃冰箱保存待测羊膜Cu和IDX含量，同时于分娩后立即在胎膜破口处（I点）及破口处与胎盘之间（11点）分别取1 xlem新鲜羊膜组织于福尔马林液中固定。I点及11点均作HE染色，排除感染病例（每高倍视野不多于4个中性粒细胞），n点进行羊膜nI型胶原含量检测。 2、荧光发光法检测羊膜LOX含量:羊膜LOX提取参照Kagan提取牛主动脉中LOX的方法。羊膜LOX含量测定使用Am讨ex Red过氧化氢检测试剂盒，用MPF巧6型荧光分光光度计检测，用荧光强度值（F值）代表各样品中的LOX含量。 3、火焰原子吸收法检测血清和羊膜Cu含量:用印ectrAA一20型原子吸收光谱仪直接检测血清Cu含量。羊膜经硝酸低温湿式消化定容，同样用原子吸收光谱仪检测羊膜Cu含量。 4、SP免疫组化法检测羊膜l型胶原:用大鼠抗人111型胶原抗体检测羊膜（n点）111型胶原含量。结果进行显微照相，并用MetaMorp丫Dplo/BX41型病理图像分析仪分析，以综合光密度值（A值）代表羊膜nI型胶原含量。 5、统计学分析方法:应用SSPS 11 .0软件对数据进行统计学处理。所得数据均以又土s表示，组间比较采用独立样本t检验。各数据间的相关关系采用线性相关分析。结果 一、妊娠37一42周孕妇，血清Cu与羊膜Cu含量存在明显的正相关关系，相关系数为0.821（p<0.001），除此外血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX、羊膜l型胶原含量之间均无相关关系（p>0.05）。 二、妊娠34一36十6周孕妇，血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOx、羊膜111型胶原含量之间均成显著正相关（p<0.001或p<0.01）。 三、妊娠28一33十‘周孕妇，血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOx、羊膜111型胶原含量之间均成显著正相关。 四、妊娠37一42周孕妇，血清Cu与羊膜Cu含量在PROM组和非PROM组间无显著性差异（p>0.05）;两组孕妇羊膜LOX含量和羊膜111型胶原含量相比，前者明显低于后者（均为p<0.01）。 五、妊娠34一36+6周孕妇，PROM组血清eu、羊膜Cu、羊膜Lox、羊膜111型胶原含量均明显低于非PROM组（均为p< 0.01）。 六、妊娠25一33十6周孕妇，PROM组血清Cu、羊膜eu、羊膜功x、羊膜nI型胶原含量均明显低于非PROM组（均为p<0.01）。讨论 一、LOX和Cu促羊膜胶原纤维发育成熟的分子生物学机制 LOX主要由羊膜上皮细胞产生，Cu是LOX的必需活性基团。LOX可以催化胶原纤维中的赖氨酸及经赖氨酸残基氧化脱氨，形成6一半醛残基，这些结构一旦形成，就可以与临近的醛化的或其他未醛化的赖氨酸残基通过接下来的非酶促反应自然缩合形成分子内和分子间的交联。这种交联结构就使胶原纤维相互紧紧地连接起来，交织成稳定的网状，具有了强大的弹性与韧性，并能抵抗胶原酶的水解，发育成熟。因此，LOX是羊膜胶原纤维通过共价交联取得稳定性和发育成熟的关键酶。 二、对于足月妊娠孕妇，羊膜LOX和羊膜111型胶原的含量与血清Cu和羊膜Cu含量不相关，这说明在妊娠足月后影响羊膜LOX和羊膜111型胶原含量的主要因素可能不再是Cu，而可能与羊膜的退?