论文部分内容阅读
目的本实验以Aβ25-35肽诱导Neuro-2a细胞损伤,建立体外阿尔茨海默病(AD)的细胞模型。通过外源性给予H2S供体(NaHS),观察不同浓度H2S对毒性Aβ25-35肽诱导的Neuro-2a细胞自噬性死亡的影响及其可能相关的机制,旨在为H2S对AD的治疗提供更多的依据。方法将Neuro-2a细胞随机分为空白对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-35+NaHS组、Aβ25-35+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、NaHS组及Aβ25-35+NaHS+NVP-BEZ235组,Aβ25-35+Na HS组和Aβ25-35+3-MA组细胞分别用NaHS和3-MA预处理2 h后均加用Aβ25-35继续处理24h,Aβ25-35+NaHS+NVP-BEZ235组除加入Na HS预处理外需在Aβ25-35处理前0.5 h加入NVP-BEZ235。采用MTT法观察各组细胞存活率,蛋白质印迹法检测自噬蛋白Beclin-1、微管相关蛋白(LC3)及P62的表达,免疫荧光法检测LC3的表达及分布,透射电镜法观察自噬体的形成。结果(1)与空白对照组相比,Aβ25-35作用细胞后,细胞存活率降低(P<0.05),Beclin-1及LC3-Ⅱ表达增加,P62表达降低(P<0.05),荧光显微镜及电镜下可见细胞自噬体明显增多。(2)与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+3-MA组和Aβ25-35+Na HS组细胞存活率均增高(P<0.05),Beclin-1及LC3-Ⅱ表达降低,P62增高(P<0.05),自噬体减少。(3)Aβ25-35+NaHS组p-Akt和p-mTOR的表达高于Aβ25-35组(P<0.05),而加入特异性PI3K/Akt通路抑制剂NVP-BEZ235后,Aβ25-35+NaHS+NVP-BEZ235组细胞p-Akt和p-mTOR表达与Aβ25-35+NaHS组相比降低(P<0.05)。结论外源性H2S能对抗Aβ25-35的细胞毒性,可能与活化PI3K/Akt/mTOR途径抑制Aβ25-35引起的细胞自噬相关。