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阿尔茨海姆病(Alzheimer’s disease, AD)是一种神经变性性疾病。AD发病机制中较为公认的是中枢神经胆碱能系统损伤学说。本研究组以前的研究表明骨形态发生蛋白4(Bone morphogenetic protein4, BMP4)可在离体条件下诱导成年大鼠海马区神经干细胞的胆碱能分化,并在在体条件下上调该区神经细胞的胆碱能表达。但BMP4是否仅诱导神经干细胞的胆碱能分化,对神经元的胆碱能表达是否也具有上调作用,尚不了解。通过脑内海马齿状回注入BMP4上调该区神经细胞胆碱能表达,是否对AD模型大鼠具有治疗作用,国内外尚未见报道。 目的:通过观察BMP4对离体培养的大鼠海马区神经干细胞的分化和神经元的胆碱能表达的影响,以进一步了解BMP4对神经干细胞胆碱能诱导分化作用和明确对神经元胆碱能表达是否具有上调作用;通过将BMP4注入成年大鼠海马齿状回区,进一步了解BMP4体内对成年大鼠海马齿状回区神经细胞的胆碱能表达的作用;通过将BMP4注入海马齿状回区,了解其对AD模型:大鼠是否具有治疗作用。 方法:(1) 从幼龄SD大鼠海马区分离并培养神经干细胞,并行Nestin免疫细胞化学染色鉴定。在培养液中加入或不加入BMP4,用ChAT免疫细胞化学染色及FITC标记的流式细胞检测法,鉴定胆碱能神经细胞。(2) 从胎龄SD大鼠海马及大脑皮层分离并培养神经元,并行MAP2免疫细胞化学染色鉴定。在培养液中加入或不加入BMP4,用ChAT免疫细胞化学染色及FITC标记的流式细胞检测法,鉴定胆碱能神经细胞。(3)在脑立体定位仪下,将BMP4或NS注入成年大鼠左侧海马齿状回,28天后取海马齿状回脑组织,行ChAT免疫组化染色,用Image-prog-plus图像分析系统测量海马齿状回ChAT阳性细胞面积,数据采用STATA7.0软件进行t检验。(4) 在脑立体定位仪下,离断成年大鼠左侧穹隆海马伞,建立AD模型。将BMP4或NS注入AD模型大鼠手术侧海马齿状回区,28天后用Mirros水迷宫检测大鼠空间记忆行为;并取海马齿状回脑