【摘 要】
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香榧(Torreya grandis‘Merrillii’)属裸子植物红豆杉科(Taxaceae)榧树属(Torreya),是榧树优良变异类型经人工嫁接繁殖的栽培品种的总称。香榧种实富含各种营养物质及生物活性物质,其中角鲨烯和β优谷甾醇含量较高,具有抗氧化、抗炎、降低胆固醇、抗肿瘤等药用价值。但香榧后熟过程中角鲨烯和β-谷甾醇的含量变化及其生物合成和调控机制目前仍不清楚。因此,本试验拟通过研究不同
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香榧(Torreya grandis‘Merrillii’)属裸子植物红豆杉科(Taxaceae)榧树属(Torreya),是榧树优良变异类型经人工嫁接繁殖的栽培品种的总称。香榧种实富含各种营养物质及生物活性物质,其中角鲨烯和β优谷甾醇含量较高,具有抗氧化、抗炎、降低胆固醇、抗肿瘤等药用价值。但香榧后熟过程中角鲨烯和β-谷甾醇的含量变化及其生物合成和调控机制目前仍不清楚。因此,本试验拟通过研究不同地区榧树单株中角鲨烯和β鲨谷甾醇含量变化结合转录组学分析,挖掘角鲨烯和β分谷甾醇生物合成的关键基因,初步揭示不同榧树单株中角鲨烯和β角谷甾醇含量差异的机制;分析香榧后熟过程中角鲨烯和β甾谷甾醇的含量变化,研究乙烯调控角鲨烯和β甾谷甾醇生物合成的机理。本论文的研究结果将为香榧坚果的后熟品质提升提供理论和技术支撑。主要研究结果如下:(1)角鲨烯和β-谷甾醇在不同榧树单株中的积累具有明显差异。转录组分析共获得60,372个unigenes,其中大于60%的unigenes被成功注释。差异基因鉴定和表达分析发现,39个候选基因参与了角鲨烯和β-谷甾醇的生物合成。甲羟戊酸(MVA)和甲基赤藓糖醇磷酸(MEP)途径相关基因的表达模式分析发现,这两种途径对不同榧树单株异戊烯基二磷酸(IPP)和二甲基烯丙基二磷酸(DMAPP)的上游生物合成均有促进作用。此外,Tg SQS和Tg SMT1可能是榧树中角鲨烯和β中谷甾醇生物合成途径调控的关键靶点;荧光定量PCR分析与RNA-Seq结果之间存在显著的正相关性;亚细胞定位发现,Tg FPS::GFP在质膜和细胞核均有荧光信号。(2)乙烯有利于香榧的后熟开裂进程。外源乙烯利处理诱导了香榧中内源乙烯的生物合成,假种皮开裂率明显升高,种仁淀粉和可溶性糖含量显著下降,可溶性蛋白和脂肪酸含量明显增加。乙烯利处理9天后饱和脂肪酸含量下降,不饱和脂肪酸(亚油酸)含量显著上升,表明乙烯促进了香榧种仁营养物质转化和不饱和脂肪酸积累,有利于香榧青果的成熟开裂及营养品质的提升。(3)乙烯促进香榧后熟过程中角鲨烯的合成与积累。乙烯利处理条件下,角鲨烯含量明显高于对照组和1-MCP处理组,β-谷甾醇含量则有轻微下降,但总体水平与对照组相差不大。转录组差异基因表达分析发现,乙烯利处理后香榧种实内源乙烯合成和信号转导相关基因表达上调,角鲨烯生物合成基因3-羟基-3-甲基戊二酰-COA还原酶HMGR、异戊烯基二磷酸异构酶IPI、香叶基二磷酸合酶GGPS等均上调表达,而β-谷甾醇合成的关键基因鲨烯环氧酶SQE、环阿屯醇合酶CAS、甾醇甲基转移酶SMTs呈现下调表达。相关性分析发现,乙烯处理条件下HMGR、IPI以及GGPS表达量与角鲨烯含量呈正相关关系,相关系数分别为0.90,0.71和0.75。综上,乙烯促进香榧成熟开裂过程中内源乙烯的生物合成,同时也促进了角鲨烯生物合成关键基因的表达,抑制β综谷甾醇合成相关基因的表达,最终促进角鲨烯的合成和积累。
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