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原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。肝癌早期诊断率不高,手术切除率低,近年来肝癌研究中取得许多进展,但总体预后仍然较差。大多数肝癌患者伴有肝炎背景、肝硬化及肝功能障碍,以致目前的介入治疗作用有限。中医中药治疗肿瘤是我国在肿瘤治疗领域的一大特色,它不仅毒副作用小,而且作用途径比较广泛。半枝莲为唇形科黄芩属植物半枝莲(Scutellaria barbate D.Don,SB)的干燥全草,有清热利湿、解毒消肿、抗癌等功效,常用于治疗肝脏疾病如肝炎、肝癌等。反应停具有抗血管生成及免疫调节作用,在肝癌的研究中也显示了一定的抗肿瘤作用。本课题通过BALB/C小鼠皮下接种肝癌H22建立移植瘤模型,采用半枝莲乙醇提取液瘤内注射联合应用反应停治疗小鼠肝癌,初步探讨两药联合治疗肝癌的效果。方法1.体外培养小鼠肝癌H22细胞,取对数生长期细胞试验。2.乙醇回流提取半枝莲。3. H22细胞随机分为正常对照组,溶剂(1%乙醇)对照组和SB(0.125 mg/ml,0.25 mg/ml,0.5 mg/ml,1.0㎎/ml原药材浓度;溶于1%乙醇)治疗组。采用MTT法检测半枝莲和1%乙醇对H22细胞生长的影响。Bliss法计算SB对H22细胞IC50值。4.接种H22细胞于BALB/C小鼠皮下建立肝癌H22的移植瘤模型。28只雄性BALB/C小鼠随机分为4组,每组7只。A组:反应停50mg/kg/d灌胃D1-12;B组: SB 1g/ml(原药材浓度溶于1%乙醇) 0.2～0.5ml瘤内注射D6,8,10,12;C组: SB、反应停联合用药组,给药方法分别与A、B组相同;D组:对照组,1%乙醇0.2～0.5ml瘤内注射D6,8,10,12。自接种第四日起每日测肿瘤直径,第12日处死小鼠,称取瘤重。观察肿瘤大小和瘤重比较抑瘤效果。5.移植瘤采用抗CD31单抗做免疫组化染色,测定移植瘤组织微血管密度(MVD)。结果1.体外试验,SB提取液对小鼠肝癌H22细胞增殖有较强的抑制作用,且这种作用呈一定的剂量和时间依赖性。SB 0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml和1.0mg/ml处理H22细胞24h,细胞抑制率分别为(21.01±3.61)%、(25.71±4.52)%、(36.25±2.71)%和(52.12±0.49)%;处理48h,细胞抑制率分别为(32.77±1.96)%、(41.49±6.34)%、(55.17±4.10)%和(68.35±3.05)%;处理72h,细胞抑制率分别为(35.43±6.55)%、(44.44±3.84)%、(58.91±8.71)%和(81.00±5.03)%,以上各组细胞抑制率与溶剂对照组相比均有显著差异(p﹤0.01);溶剂(1%乙醇)对照组对H22细胞24h,48h和72h的抑制率分别为(4.71±3.86)%,(5.89±2.36)%和(3.57±0.28)%。1%乙醇处理组与正常对照组OD值的差异均无统计意义(p>0.05)。SB处理24h、48h和72h的IC50分别为0.63 mg/ml, 0.36 mg/ml和0.30 mg/ml。2.体内试验,A组,B组,C组和D组瘤重分别(0.30±0.06) g (p>0.05,vs control),(0.17±0.06) g (p<0.05,vs control),(0.10±0.05) g (p<0.01,vs control) and (0.36±0.06) g。A组、C组之间瘤重差异有显著统计意义(p<0.01);B组、C组之间差异有统计意义(p<0.05)。A,B和C三组抑瘤率分别为18.11%,53.15%和71.65%;协同系数0.74。3.A组,B组,C组和D组的微血管计数MVC分别为(42.14±10.75)、(54.43±12.26)、(25.29±11.15)和(82.29±10.92)。三个治疗组和D组之间比较有统计意义(p<0.01)。SNK-q检验显示A组和B组之间差异不明显(p>0.05)。A组、B组分别与C组比较差异有统计意义(p<0.05,A组vs C组;p<0.01, B组vs C组)。结论:1.结果表明半枝莲瘤内注射联合应用反应停对小鼠H22肝癌移植瘤有较强的抑制作用。2.半枝莲和反应停均有抗血管生成作用,且两药联用对肿瘤微血管生成的抑制有协同作用。