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背景与目的食管恶性肿瘤是影响人类健康的常见的消化系统恶性肿瘤,全世界每年新发病例人数约为48万例,死亡病例约40万例。地域不同,食管癌的发病率也不相同,大部分病例分布于发展中国家。我国作为食管恶性肿瘤高发的国家之一,每年的新发病例约25万例,主要分布在河南、山西和河北三省交界的太行山区域、苏北地区、潮汕地区,另外还有四川盆地的川北地区等。在食管癌各种病理类型中,鳞状细胞癌约占95%以上。食管癌流行病学统计结果显示,食管癌的发生与患者的年龄、性别、种族、遗传因素、饮食习惯、生活环境、地理环境及职业等均有着密切关联。随着分子生物学的不断发展,研究发现食管癌的发生发展受抑癌基因和促癌基因表达异常有关,是多种因素长期相互作用的结果。膜联蛋白-1(Annexin-1)是膜联蛋白(Annexin)家族中最具特征性的成员之一,也是目前研究得比较透彻的膜联蛋白。Annexin-1也就是人们常说的质皮素1(lipocortin-1)、ANXA-1、calpactin-1、内结合素(endonex in)或p35,它是第一个被克隆出来的Annexin家族成员。Annexin-1的编码基因位于人类染色体9pl2-q21.2上,含有13个外显子和12个内含子,Annexin-1的cDNA含有1041bp的开放阅读框(open reading frame, ORF),翻译的Annexin-1蛋白质由346个氨基酸组成,分子量为37kDa。Annexin-1是一个多功能蛋白,在体内广泛参与多种重要的生物活动,如抗炎作用,诱导细胞分化,细胞的粘附和迁移,细胞的增殖及凋亡,信号的传导等。血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)是血管内皮生长因子家族的新成员,于1996年由Joukov V等从前列腺癌细胞培养液中发现,能够与受体VEGFR-3(flt-4)结合,然后在体内产生信号传导,诱导血管及淋巴管的新生。VEGF-C基因位于人类染色体4q34上,通过克隆前列腺癌细胞系PC-3细胞cDNA文库后,再对该文库进行筛选可得到其cDNA序列。VEGF-C基因包含2400bp,翻译出的蛋白质VEGF-C含有386个氨基酸残基,分子量为42.9kDa。VEGF-C蛋白是一个二聚体,由分子量为29kD和31kD的两条多肽链组成,可作用于内皮细胞在胶原凝胶中移动。VEGF-C作为第一个被发现的淋巴管生成因子,被认为是特异性的作用于淋巴管内皮细胞的生长因子,并且与肿瘤区域淋巴结转移密切相关。目前对Annexin-1和VEGF-C在食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)组织中表达的相关性研究国内尚未见报道,它们与食管鳞癌的发生发展及浸润转移之间的关系尚不清楚。本实验对食管鳞癌中Annexin-1和VEGF-C蛋白表达水平进行检测,探讨两者在食管鳞癌的发生发展过程中的作用机制,以及它们与食管鳞癌各临床病理特征的关系,同时分析两者之间的相关性,为指导食管鳞癌的早期诊断和临床治疗探索新的方法。材料与方法1.标本收集2011年7月至2012年7月郑州大学第二附属医院胸外科手术切除的食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)标本和癌旁正常食管组织的标本。总共获得样标本80组,各个标本临床资料完整,术前均未接受放疗和化疗。2.研究方法所有标本均依次经固定、石蜡包埋、切片,然后应用SP免疫组化法进行染色,按试剂盒的说明书进行操作。3.免疫组化结果的判定Annexin-1蛋白阳性表达主要位于细胞膜和细胞质,呈棕黄色；VEGF-C蛋白阳性表达主要位于胞质,为棕黄色颗粒样物质。每例标本于40×10倍镜下随机选取10个视野,每个视野计数100个细胞,按阳性细胞所占的百分率和着色深度进行结果判定。A：阳性细胞百分数<25%为0分,25%～为1分,50%-为2分,≥75%为3分；B：染色强度无染色为0分,淡黄色为1分,黄色为2分,深黄色为3分。A+B≥3分为阳性。4.统计学处理采用SPSS17.0软件,应用分类资料的想x2检验对两组组织中Annexin-1和VEGF-C蛋白表达的差异及食管鳞癌组织中Annexin-1和VEGF-C蛋白的表达与临床病理特征的关系进行统计学分析,应用Spearman相关分析两种蛋白在食管鳞癌组织中表达的关联性,以α=0.05为检验水准。结果1.Annexin-1在癌旁正常食管组织、ESCC中的表达以及与临床病理特征的关系Annexin-1蛋白在ESCC中的阳性表达率为38.75%(31/80),低于癌旁正常食管组织83.75%(67/80),二者差异有统计学意义(x2=34.128,P=0.000)。Annexin-1在ESCC中的阳性率,年龄≤55岁组为35.71%(10/28),>55岁组为41.18%(21/52),P=0.683：男性组为40.00%(20/50),女性组为36.67%(11/30),P=0.767；高分化组为45.45%(15/33),中分化组为35.71%(10/28),低分化组为31.58%(6/19),P=0.564；侵润深度未超出粘膜下层组为50.00%(4/8)、侵润肌层组为45.00%(9/20),侵润至外膜及以外组的阳性率为34.62%(18/52),P=0.568；有淋巴结转移组为42.86%(18/42),无淋巴结转移组为34.21%(13/38),P=0.428。2. VEGF-C在癌旁正常食管组织、ESCC中的表达以及与临床病理特征的关系VEGF-C蛋白在ESCC中的阳性表达率为71.25%(57/80),高于癌旁正常食管组织的46.25%(37/80),二者差异有统计学意义(x2=10.316,P=0.001)。VEGF-C在ESCC中的阳性率,≤55岁组为60.71%(17/28),>55岁组为76.92%(40/52),P=0.127；男性组为78.00%(39/50),女性组为60.00%(18/30),P=0.085；高分化组为72.73%(24/33),中分化组为71.43%(20/28),低分化组为68.42%(13/19),P=0.947；侵润深度未超出粘膜下层组为62.50%(5/8),侵润肌层组为70.00%(14/20),侵润至外膜及以外组为73.08%(38/52),p=0.819；有淋巴结转移组为95.24%(40/42),无淋巴结转移组为44.74%(17/38),P=0.000。3. Annexin-1和VEGF-C在ESCC织中的表达的关系在ESCC中,Annexin-1及VEGF-C表达均为阳性有9例,同时为阴性的仅有1例,Annexin-1表达阴性VEGF-C表达阳性的有48例,而Annexin-1表达阳性VEGF-C表达阴性的有22例。对两者进行Spearman相关分析,二者表达的呈负相关关系(r=-0.596,P=0.000)。结论1. Annexin-1和VEGF-C表达水平异常与食管鳞癌的发生发展有关。2. Annexin-1的表达水平与食管鳞癌患者的年龄、性别、分化程度、侵润深度及淋巴结转移均无关。3. VEGF-C的表达水平与食管鳞癌患者淋巴结的转移相关,与患者的年龄、性别、分化程度及侵润深度无关。4. Annexin-1与VEGF-C在食管鳞癌组织中的表达水平在统计学上存在负相关。