论文部分内容阅读
目的：观察以脂质体转染HPA和EP-CAM基因对人胆囊癌细胞株GBC-SD体内抑瘤作用，探讨联合基因治疗胆囊癌的可能性。方法：1.脂质体Lipofectamine2000转染法将pcDNATM6.2-HPA-DsRed,pcDNATM6.2GW/EmGFPmiR-EPCAM转染人胆囊癌细胞株GBC-SD。应用RT-PCR法检测转染后细胞目的基因的表达。2.选用裸鼠40只，随机分为5组。于裸鼠腋外侧皮下分别接种原始GBC-SD细胞组（阴性对照A组）、转染空载体的GBC-SD细胞组（空白对照B组）、干扰Hpa基因的细胞（C组）、干扰EP-CAM基因的细胞（D组）和共干扰二者的细胞（E组），观察裸鼠皮下移植瘤成瘤情况。自皮下接种后第7d起，每3d用游标卡尺测量瘤体最长径(a)与最短径(b)，观察肿瘤体积变化，并计算抑瘤率。3.应用Western-blot法检测五组肿瘤组织中Hpa、EP-CAM蛋白的表达，与阴性对照组和空白对照组比较差异变化。4.采用免疫组织化学法检测各组标本中Ep-CAM和Hpa的表达情况，进行对比分析。5.统计学处理:所有数据经统计软件Spss16.0统计分析。采用了单因素方差分析（one-wayANOVA）和方差齐性检验，秩和检验，配对样本t检验，假设检验水准为α=0.05。结果：1.RT-PCR:结果证实Hpa和EP-CAM分别及共转染基因经筛选后能在GBC-SD细胞中稳定表达。2.在裸鼠胆囊癌皮下移植瘤模型中，经Hpa、EP-CAM转染的胆囊癌细胞成瘤能力较阴性对照及空白对照组降低，C、D、E组肿瘤生长速度及体积明显低于前两组（P<0.05）,共转染组抑瘤率与单转染组差异有统计学意义（P<0.05）。3.Western-blot结果显示C、D、E组与A、B组比较Hpa、EP-CAM的蛋白表达面积大小不同,颜色不一。免疫组织化学法检测C、D、E各组标本中Hpa和EP-CAM蛋白表达阳性率明显小于A、B两组肿瘤组织(P<0.05)。结论：1.胆囊癌细胞中Hpa、EP-CAM表达有明显增高。2.体内实验证实，沉默Hpa、EP-CAM基因可抑制胆囊癌GBC-SD细胞裸鼠皮下移植瘤的生长，共同干扰组抑瘤效果更优于单独干扰组，提示联合基因治疗更优于单个基因。