甾体激素在维持生命、调节生殖功能、免疫调节、应激反应等方面有明确的作用。甾体激素主要通过甾体激素受体发挥生物学效应，本研究在克隆了鸽子卵清蛋白(OVA)、雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β(ERβ)、孕酮受体(PGR)和糖皮质激素受体(GR)基因的cDNA序列的基础上，利用实时荧光定量PCR方法，研究了上述基因的组织表达分布、表达丰度以及繁殖周期中输卵管和卵巢的表达变化规律。成功培养鸽子输卵管上皮细胞(OECs)，并用RNA干扰(RNAi)技术研究了ERα基因对鸽子OVA表达的调控作用。主要研究结果如下:　　1.鸽子OVA、ERα、ERβ、GR和PGR基因cDNA序列的获得与分析　　利用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增(RACE)技术，首次克隆了鸽子OVA、ERα、ERβ和GR全长编码序列(coding sequence，CDS)，以及PGR部分cDNA序列。结果表明，鸽子OVA基因eDNA全长为1433bp(GenBank登录号:JQ345718)，其中包括117bp的5UTR（untranslated region，UTR），1161bp的编码区(coding region，CDS)和154bp的3UTR，共编码386个氨基酸。与鸸鹋的同源性为71％，与鸡的同源性为67％。　　本实验获得鸽子ERα基因全长CDS序列（GenBank登录号:JX413115.1），其中包括27bp的5UTR、1764bp的编码区和39bp的3UTR。翻译编码587个氨基酸，与鸡的同源性为99％，与爬行动物中鳄鱼和龟的同源性分别为92％和91％，与人的同源性为78％。　　本实验获得鸽子ERβ基因全长cDNA序列（GenBank登录号:JX413116.1）。其中包括274bp的5UTR、1662bp的编码区和496bp的3UTR。翻译编码553个氨基酸，与鸡的同源性为95％，与爬行动物中鳄鱼和龟的同源性分别为88％和86％，与人的同源性为79％。　　实验获得鸽子GR基因cDNA序列2438bp，其中包括全长为2313bp的CDS，102bp的5UTR序列，以及18bp的3UTR序列。翻译编码770个氨基酸，与鸡的同源性为94％，与鳄鱼的同源性为85％，与人的同源性为75％。　　实验获得鸽子PGR基因cDNA序列1063bp，全部为CDS区域。共翻译编码354个氨基酸，该氨基酸片段包括鸽子PGR配体结合域的一部分以及DNA结合结构域的一部分。　　2.OVA、ERα、ERβ、PGR和GR基因mRNA的组织表达分布、组织表达丰度及不同繁殖阶段输卵管和卵巢中的表达变化研究　　应用实时荧光定量PCR方法研究了OVA、ERα、ERβ、PGR和GR基因在鸽子体内的组织表达分布和表达丰度，以及上述基因在鸽子繁殖不同时期（产蛋期、就巢期和哺乳期）卵巢和输卵管中表达差异。结果表明鸽子的OVA基因mRNA除了在输卵管高表达外，在其他组织都痕量表达;鸽子的ERα基因在各个组织中广泛表达，在输卵管的表达量最高，在肝中表达量也较高，在肺里表达量最低;鸽子的ERβ基因在卵巢和肾脏中的表达量最高，在肝、嗉囊和胃中表达量也较高，在肺、腹脂、胰、心和骨骼肌里痕量表达;鸽子的PGR基因在多个组织中有表达，在输卵管中表达量最高，在睾丸中表达量也较高，在胰中表达量最低;鸽子的GR基因广泛表达，在睾丸中表达量最高，在嗉囊中表达量最低。　　不同繁殖时期差异表达结果显示:产蛋结束后，鸽子的输卵管中OVA表达量显著下降;ERα在输卵管中，产蛋期之后ERα的表达量升高，就巢期最高，与产蛋期差异显著;在卵巢中，就巢期时ERα表达量最低，但与其他阶段的表达差异不显著;ERβ在就巢期的卵巢中高表达，产蛋期表达量最低;PGR基因在产蛋期的卵巢和输卵管中高表达，产蛋后表达量下降;GR基因在产蛋期的卵巢和输卵管中表达量最低，与其他两个时期的差异不显著。　　3.鸽子OECs培养　　以产蛋期雌鸽为材料，通过输卵管内皮组织分离、胶原酶和胰酶复合消化、细胞纯化等技术环节的摸索，原代培养了鸽子OECs，同时通过细胞形态观察及荧光定量PCR检测OVA基因mRNA表达量的方法鉴定所获得的细胞。为进一步探讨禽类OVA基因转录的分子机理建立了细胞模型。　　4.鸽子ERα对OECs转录OVA基因mRNA的调控研究　　通过鸽子OECs的培养，利用RNAi研究了ERα基因对鸽子OECs OVA基因mRNA转录调控，结果表明，干扰鸽子ERα基因mRNA后，OVA基因mRNA的表达量显著升高，说明ERα在甾体激素调控OVA分泌过程中发挥重要作用。