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目的通过构建多功能共载药聚合物胶束,高效包载多西他赛与核干因子,并为胶束添加靶向基团,研究其对于前列腺癌细胞的影响。方法1.聚合物的构建及修饰:以ε-己内酯和γ-甲酸叔丁酯-ε-己内酯(tBuCCL)为混合单体,以一端为乙缩醛的PEO(Acetal-PEO,Mw=8655 g/mol)为引发剂进行聚合反应,形成具有羧基官能化的大分子长链结构PEO-b-PCL,并对其进行化学基团的修饰,为PCL疏水端修饰带有正电性的精胺(Spermine,SP)基团以结合siRNA,在PEO亲水端分别修饰DCL多肽及TAT多肽以实现靶向及穿膜。分别通过核磁氢谱(1H NMR)、傅立叶红外光谱(FT-IR)、凝胶渗透色谱仪(GPC)对各步产物的化学结构、分子量及分子量分布进行表征,同时验证各肽段修饰程度。2.多功能共载药胶束的构建及其物理化学性质研究:利用制备共载药胶束,使其同时携载化疗药物多西他赛(DTX)和沉默核干因子(NS)的NS-siRNA。通过荧光探针法测定临界胶束浓度,通过DLS法测量空胶束和共载胶束的粒径、Zeta电位,利用高效液相色谱(HPLC)测算载药率和包封率,利用凝胶电泳探索胶束与药物和siRNA结合的最佳比例。3.体外细胞水平评价共载药胶束对去势抵抗性前列腺癌细胞的影响:通过MTT法评价聚合物胶束的细胞相容性,同时验证共载药胶束对细胞活力的影响,通过RT-qPCR证明共载药胶束对于NS基因表达的影响,Western blot证明其对NS蛋白表达的影响。结果Acetal-PEO-b-PCL聚合物主链的1H NMR谱图1.20 ppm处可见乙氧基上甲基特征峰,在4.64 ppm处则有缩醛叔碳上氢原子的特征峰,证实其结构分子量为23311 g/mol,修饰SP后1H NMR谱图在3.0-3.3 ppm处出现精胺特征峰,证实SP已连接。修饰DCL及TAT多肽后,红外光谱显示1500-1560 cm-1及1630-1690 cm-1处出现了酰胺特征峰,证实多肽链段已连接。聚合物临界胶束浓度为1.17μg/mL,共载药胶束的粒径为152.8 nm,Zeta电位在修饰SP前为-12.8mv,修饰SP后变为+15.0 mv。凝胶电泳证实,胶束携载NS-siRNA呈电中性时N/P比为25:1。经测算,胶束的载药率为7.62%,包封率20.27%。MTT显示聚合物浓度为256μg/mL时,细胞存活率仍可保持在80%以上,而共载胶束在其有效药物浓度为50μg/m L时即可使细胞存活率降至20%,显著低于等量DTX或NS-siRNA。RT-qPCR表明,共载药聚合物胶束降低了PCa细胞中NS基因的表达,而Western blot证明其下调了NS蛋白的表达,相比于Lipo 2000脂质体,其对于C4-2细胞的表达效果要高于PC-3细胞。结论1.基于PEO-PCL的聚合物可以形成胶束形态,并具有良好的理化性质和较好的生物相容性,可以作为疏水性药物的运载体。2.PEO-PCL聚合物链段在添加了SP基团后,能够以聚合物胶束的形式同时有效携载疏水性药物DTX及anti-NS siRNA,对细胞产生毒性,且调低NS基因及蛋白的表达,其效果优于单纯DTX药物或anti-NS siRNA本身,具有协同增效作用。3.通过对聚合物胶束的亲水端修饰DCL和TAT多肽,能够有效提升其对于去势抵抗性前列腺癌C4-2细胞的靶向性。4、带有靶头的共载药胶束能够最大限度的发挥其携载化疗药物和基因药物的能力,起到抑制和破坏去势抵抗性前列腺癌细胞的效果,具有应用于CRPC的治疗的潜力。